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Articulo de referencia

Antígeno nuclear extraíble

Los antígenos nucleares extraíbles ( ENA ) son más de 100 antígenos citoplasmáticos y nucleares solubles diferentes . Se denominan "extraíbles" porque pueden eliminarse de los n...

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Los antígenos nucleares extraíbles ( ENA ) son más de 100 antígenos citoplasmáticos y nucleares solubles diferentes . Se denominan "extraíbles" porque pueden eliminarse de los núcleos celulares mediante solución salina y representan seis proteínas principales: Ro, La, Sm, RNP, Scl-70 y Jo1. La mayoría de los ENA forman parte de complejos de espliceosomas o nucleosomas y son un tipo de ribonucleoproteína nuclear pequeña (snRNP). Su ubicación en el núcleo y su asociación con espliceosomas o nucleosomas hacen que estos ENA se asocien con ARN y proteínas adicionales, como las polimerasas. Esta característica de los ENA a menudo dificulta su purificación y cuantificación para uso clínico. [ 1 ]

Aplicaciones clínicas

Un panel de antígenos nucleares extraíbles (PANEL ENA) detecta la presencia de autoanticuerpos en la sangre que reaccionan con proteínas del núcleo celular. Generalmente se realiza como seguimiento a una prueba de anticuerpos antinucleares ( ANA ) positiva y cuando se presentan síntomas de un trastorno autoinmune . La prueba ANA detecta la presencia o ausencia de autoanticuerpos, mientras que el panel ENA evalúa qué proteínas del núcleo celular reconocen los autoanticuerpos. El panel ENA ayuda al diagnóstico, la distinción y el seguimiento de la progresión de las enfermedades autoinmunes y se realiza con una simple extracción de sangre. Si bien los niveles de autoanticuerpos pueden fluctuar a lo largo de la vida, una vez que se desarrollan, la persona los tendrá de forma permanente. Los autoanticuerpos contra estos antígenos se asocian con trastornos específicos del tejido conectivo. De hecho, en el 84,3 % de las muestras positivas para anti-ENA, también se encontraron reactivos ANA. [ 1 ] El uso de pruebas de autoanticuerpos anti-ENA puede servir como verificación adicional de un trastorno autoinmune, ya que una prueba ANA positiva por sí sola no es suficiente para el diagnóstico. De hecho, se pueden encontrar niveles bajos de ANA en pacientes sanos. Las aplicaciones de las pruebas anti-ENA varían desde excluir grupos de pacientes de grupos específicos, enfermedades del tejido conectivo, hasta monitorear la actividad de la enfermedad. En esencia, permite a los médicos excluir trastornos autoinmunes específicos si un autoanticuerpo en particular no está presente, y les permite rastrear la progresión de una enfermedad si los niveles de estos autoanticuerpos aumentan o disminuyen. Para confirmar la presencia de anti-ENA, actualmente se recomienda utilizar dos o más métodos para confirmar anti-ENA y evitar falsos positivos. El diagnóstico de enfermedades autoinmunes del tejido conectivo (ETC) se realiza mediante el análisis de síntomas y signos clínicos, pero también mediante la identificación de los autoanticuerpos dirigidos contra antígenos nucleares. Un artículo de 2002 también busca comparar las pruebas de diagnóstico utilizadas en laboratorios de inmunología para medir anti-ENA y formas de mejorar estas pruebas e informes. La doble inmunodifusión (DID) y la contrainmunoelectroforesis (CIEP), dos formas de técnicas basadas en geles , se utilizan para obtener información sobre la importancia clínica y el papel de estos anticuerpos en aquellos con CTD. [ 2 ]

Técnicas

A base de gel

Desde su descubrimiento, los ENA se han utilizado como herramienta diagnóstica en enfermedades del tejido conectivo. En trabajos iniciales, se emplearon dos técnicas basadas en gel ampliamente utilizadas para identificar los anti-ENA y su asociación con la enfermedad: la inmunodifusión doble (DID) [ 3 ] y la contrainmunoelectroforesis (CIEP). Ambas técnicas requieren la precipitación de antígenos para obtener resultados válidos. Dependiendo del anti-ENA que se investigue, se puede utilizar una técnica u otra. Por ejemplo, el antígeno Scl-70 tiene una carga negativa menor, lo que puede provocar que el antígeno se desplace en la misma dirección que el anticuerpo. Esto resultaría en la no precipitación del complejo anticuerpo-antígeno, lo que llevaría a resultados inválidos. [ 4 ] Además, algunos anticuerpos anti-SS-B comúnmente identificados en el síndrome de Sjögren pueden no detectarse con este método. Sin embargo, este método es económicamente viable y específico para confirmar un diagnóstico. Al analizar los datos de estas técnicas basadas en gel, es importante tener en cuenta dos sensibilidades: la sensibilidad del ensayo y la sensibilidad de la enfermedad. La sensibilidad del ensayo es la capacidad de reconocer la presencia de un anticuerpo, mientras que la sensibilidad a la enfermedad es la capacidad de reconocer la frecuencia con la que el anticuerpo aparece en una enfermedad. Debido a las limitaciones de las técnicas basadas en gel en cuanto a la sensibilidad a la enfermedad, se han explorado otras técnicas para aumentar la sensibilidad del ensayo sin disminuir la sensibilidad a la enfermedad. Por ejemplo, en pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES), solo entre el 8 % y el 40 % presentan anticuerpos anti-SM detectables al utilizar ensayos basados ​​en gel. Se ha demostrado que la CIEP es más sensible que la DID. [ 5 ]

Hemaglutinación, ELISA, Western Blot

Tres técnicas adicionales, la hemaglutinación pasiva, el ensayo inmunoenzimático (ELISA) y la transferencia Western (WB), pueden utilizarse para identificar ENA y vincularlos a enfermedades específicas. La hemaglutinación pasiva fue popular a finales de la década de 1970, pero se han realizado muy pocos estudios con ella y se limitó a los anticuerpos anti-Sm y anti-proteína ribonuclear (RNP). [ 5 ] El ensayo inmunoenzimático (ELISA) se ha convertido en la técnica más utilizada para detectar anti-ENA debido a su sencillez, cuantitativo y alto volumen de muestras. Si bien este método ha aumentado la sensibilidad del ensayo y es eficiente para laboratorios con alto volumen de muestras, tiene una especificidad de enfermedad mucho menor que las técnicas alternativas. Esto se debe a la imposibilidad de aislar adecuadamente los ENA sin grandes costes debido a su asociación con complejos en el núcleo celular. Otra preocupación con la técnica ELISA es que se han reportado anticuerpos anti-Sm en pacientes sin LES, lo que podría llevar a una investigación excesiva, pero podría deberse a la calidad de la fuente de antígeno utilizada. [ 5 ] La transferencia Western tiene una desventaja importante, ya que no puede detectar anticuerpos dirigidos contra epítopos conformacionales. Además, pueden ocurrir falsos positivos y la especificidad de la enfermedad es menor que la de otras técnicas. Si bien cada técnica tiene sus ventajas y desventajas, ELISA tiene las desventajas menos graves en cuanto a la posibilidad de falsos positivos (que son menos peligrosos que los falsos negativos) y su costo. [ 5 ]

Muchos laboratorios utilizan una combinación de ambas técnicas para mejorar la eficiencia sin sacrificar la especificidad. La recomendación actual de los talleres de consenso europeos es realizar la prueba ELISA para detectar anticuerpos anti-ENA positivos. Posteriormente, se realizará una prueba más específica, como la CIEP, a las muestras que resulten positivas. [ 6 ]

Los seis antígenos principales utilizados en laboratorios inmunológicos para la detección son Ro , La , Sm , RNP , Scl-70 y Jo1 , [ 7 ] que se analizan mediante técnicas de inmunodifusión doble de Ouchterlony y se confirman mediante inmunoblot . En las pruebas de anticuerpos antinucleares , estos antígenos presentan un patrón moteado. [ 8 ]

Terminología

Las ENA originalmente se referían a proteínas encontradas en un extracto salino de núcleos celulares . [ 9 ] Desde entonces, los componentes se han identificado con mayor claridad y, de hecho, incluyen muchas moléculas citoplasmáticas. Sin embargo, el nombre erróneo ha persistido. Estas proteínas están íntimamente asociadas con varias moléculas de ARN y, por lo tanto, se denominan ribonucleoproteínas , pero la nomenclatura utilizada para ellas suele ser fuente de confusión. Sm, Ro y La recibieron sus nombres a partir de las dos primeras letras de los apellidos de los pacientes en quienes se encontraron por primera vez. Dos proteínas asociadas con el síndrome de Sjögren se describieron independientemente como antígenos A y B, pero ahora se sabe que son idénticas a Ro y La respectivamente, es decir, SS-A = Ro y SS-B = La.

Las pruebas de panel ENA (antígeno nuclear extraíble) detectan autoanticuerpos contra proteínas del núcleo celular. El término "extraíble" deriva de la capacidad de extraer los antígenos del núcleo con solución salina y proteínas comunes. El método de identificación de estas muestras explica por qué también se las denomina anticuerpos contra antígenos extraídos con solución salina. [ 9 ]

ENA

Los anticuerpos anti-ENA son una agrupación de anticuerpos que se utilizan a menudo para detectar la enfermedad mixta del tejido conectivo (EMTC), el síndrome de Sjögren y el lupus eritematoso sistémico , y generalmente se componen de seis pruebas: [ 10 ]

  • anti-Sm (para LES)
  • anti-RNP (para MCTD)
  • anti-La/anti-SS-B (para el síndrome de Sjögren)
  • anti-Ro/anti-SS-A (para el síndrome de Sjögren)
  • anti-Scl70 (para la esclerodermia)
  • anti-Jo (para la dermatomiositis)

La sensibilidad y la especificidad de estas pruebas dependen del tipo de ensayo utilizado y, por lo tanto, varían según el laboratorio. La siguiente tabla ilustra la sensibilidad y la especificidad de los anticuerpos ENA para la detección del LES mediante la técnica ELISA.

Además, la prueba de ENA también se ha utilizado para el estudio de trastornos relacionados con el trigo, como la enfermedad celíaca . Un estudio realizado en 2018 analizó a pacientes con trastornos relacionados con el trigo para detectar 10 anticuerpos anti-ENA.

  • SSA (Ro)
  • SSB (La)
  • RNP/Sm
  • Jo-1
  • Sm
  • Scl-70
  • cromatina
  • Centrómero
  • Histona
  • ARN polimerasa III

El 73 % de los sujetos con enfermedad celíaca dieron positivo para anticuerpos antihistonas, siendo este el más prevalente, que suele asociarse con el lupus eritematoso inducido por fármacos . Esto implica una alta probabilidad de un trastorno autoinmune en pacientes con trastornos relacionados con el trigo. [ 12 ]

Referencias

  1. 1 2 Banhuk, Fernanda Weyand; Pahim, Bruna Corrêa; Jorge, Alex Sandro; Menolli, Rafael Andrade (30 de septiembre de 2018). " Relaciones entre anticuerpos contra antígenos nucleares extraíbles, anticuerpos antinucleares y enfermedades autoinmunes en un hospital público brasileño" . Enfermedades autoinmunes . 2018 : 1–8 . doi : 10.1155/2018/9856910 . PMC 6186355. PMID 30364021 .  
  2. ↑ Phan, Tri Giang; Wong, Richard CW; Adelstein, Stephen (2002). "Autoanticuerpos contra antígenos nucleares extraíbles: haciendo que la detección y la interpretación sean más significativas" . Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology . 9 (1): 1– 7. doi : 10.1128/CDLI.9.1.1-7.2002 . PMC 119916. PMID 11777822 .  
  3. ↑ "Abbexa - Anticuerpos, Proteínas, kits ELISA" .
  4. ↑ Bunn, C.; Kveder, T. (1996). "Contrainmunoelectroforesis e inmunodifusión para la detección de anticuerpos contra antígenos celulares solubles". En van Venrooij, WJ; Maini, RN (eds.). Manual de marcadores biológicos de enfermedades . Springer Netherlands. pp. 25–36 . doi : 10.1007/978-94-011-1670-1_3 . ISBN  978-94-011-1670-1.
  5. 1 2 3 4 Lock, RJ; Unsworth, DJ (marzo de 2001). "Anticuerpos contra antígenos nucleares extraíbles. ¿Ha afectado la deriva tecnológica a la interpretación clínica?" . Journal of Clinical Pathology . 54 (3): 187– 90. doi : 10.1136/jcp.54.3.187 . PMC 1731369 . PMID 11253128 .  
  6. ↑ Yiannaki, EE; Tzioufas, AG; Bachmann, M; Hantoumi, J; Tsikaris, V; Sakarellos-Daitsiotis, M; Sakarellos, C; Moutsopoulos, HM (1998). "El valor de los análogos sintéticos lineales de epítopos de La/SSB para la detección de autoanticuerpos contra La/SSB; especificidad, sensibilidad y comparación de métodos" . Clinical and Experimental Immunology . 112 (1): 152– 158. doi : 10.1046/j.1365-2249.1998.00558.x . PMC 1904932. PMID 9566804 .  
  7. ↑ Prince, HE; ​​Hogrefe, WR (1998). "Evaluación de un ensayo de inmunoblot lineal para la detección de anticuerpos que reconocen antígenos nucleares extraíbles" . Journal of Clinical Laboratory Analysis . 12 (5): 320– 4. doi : 10.1002/(sici)1098-2825(1998)12:5 < 320::aid-jcla13 > 3.0.co ; 2 -x . PMC 6807698. PMID 9773966 .  
  8. ↑ "Inmunopatología" .
  9. 1 2 "Panel de anticuerpos contra antígenos nucleares extraíbles (ENA)" . Pruebas de laboratorio en línea . 21 de junio de 2018. Consultado el 10 de abril de 2019 .
  10. ↑ Hoja de producto de la prueba ENA (QUANTA Lite). inovadx.com. URL: http://www.inovadx.com/Products/di_pdfs/708555/628555rEnglish.pdf ENA . Consultado el 5 de noviembre de 2007.
  11. ↑ Lock, R; Unsworth, D (2001). "Anticuerpos contra antígenos nucleares extraíbles. ¿Ha afectado la deriva tecnológica a la interpretación clínica?" . Journal of Clinical Pathology . 54 (3): 187– 190. doi : 10.1136/jcp.54.3.187 . PMC 1731369 . PMID 11253128 .  
  12. ↑ Yang, Yuanyuan; Krishna, Karthik; Deshpande, Payal; Ranganathan, Vinodh; Jayaraman, Vasanth; Wang, Tianhao; Bei, Kang; Krishnamurthy, Hari (18 de junio de 2018). " Alta frecuencia de autoanticuerpos nucleares extraíbles en trastornos relacionados con el trigo" . Biomarker Insights . 13. doi : 10.1177/1177271918782893 . PMC 6024268. PMID 29977112 .