pGLO

Izquierda: Bacterias transformadas con pGLO bajo luz ambiental. Derecha: Bacterias transformadas con pGLO visualizadas bajo luz ultravioleta.

Izquierda: Bacterias transformadas con pGLO expuestas a ampicilina y luz ambiental. Derecha: Bacterias transformadas con pGLO expuestas a ampicilina, arabinosa y luz ultravioleta.

El plásmido pGLO es un plásmido modificado genéticamente que se utiliza en biotecnología como vector para la creación de organismos genéticamente modificados . El plásmido contiene varios genes reporteros , entre los que destacan la proteína verde fluorescente (GFP) y el gen de resistencia a la ampicilina. La GFP se aisló de la medusa Aequorea victoria . Debido a que comparte un promotor bidireccional con un gen para el metabolismo de la arabinosa , el gen de la GFP se expresa en presencia de arabinosa, lo que hace que el organismo transgénico exprese su fluorescencia bajo luz ultravioleta . La GFP se puede inducir en bacterias que contienen el plásmido pGLO cultivándolas en placas con arabinosa. El plásmido pGLO es fabricado por Bio-Rad Laboratories .

pGLO está compuesto por tres genes que se unen mediante tecnología de ADN recombinante. Son los siguientes:

• Bla , que codifica la enzima betalactamasa, lo que confiere a las bacterias transformadas resistencia a la familia de antibióticos betalactámicos (como los de la familia de la penicilina ).
• araC , una región promotora que regula la expresión de GFP (específicamente, el gen GFP se expresará solo en presencia de arabinosa ).
• GFP , la proteína fluorescente verde, que emite un brillo verde si las células producen este tipo de proteína.

Al igual que la mayoría de los demás plásmidos circulares, el plásmido pGLO contiene un origen de replicación (ori), que es una región del plásmido donde se inicia la replicación. El plásmido pGLO se hizo famoso gracias a investigadores franceses que lo utilizaron para producir una coneja verde fluorescente llamada Alba .

Otras características de pGLO, como la mayoría de los demás plásmidos, incluyen un marcador seleccionable y un MCS ( sitio de clonación múltiple ) ubicado al final del gen GFP. El plásmido tiene una longitud de 5371 pares de bases . En su forma superenrollada , migra en un gel de agarosa en el rango de 4200–4500. ^{[ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]}

El gen GFP fue observado por primera vez por Osamu Shimomura ^{[ 4 ]} y su equipo en 1962 mientras estudiaban la medusa Aequorea victoria , que posee un anillo de luz azul bajo su umbela . Shimomura y su equipo aislaron la proteína aequorina de miles de medusas hasta reunir la cantidad suficiente para un análisis completo de la proteína. Fue a través del estudio de la aequorina que Shimomura descubrió pequeñas cantidades de GFP, que emite luz verde cuando la aequorina emite luz azul. Tras descubrir con éxito cómo funciona la GFP con la aequorina en la medusa, la dejó de lado para estudiar la bioluminiscencia en otros organismos.

En 1994, Marty Chalfie ^{[ 4 ]} y su equipo lograron crear bacterias y nematodos que expresaban la proteína GFP. Poco después, Roger Tsien ^{[ 5 ]} y su equipo consiguieron crear una GFP mutante capaz de emitir una gama de colores, no solo verde.

Los tres científicos recibieron el Premio Nobel de Química de 2008 ^{[ 6 ]} por el descubrimiento y desarrollo de la proteína fluorescente verde, GFP.