Etiqueta SBP

Debido a las condiciones de elución suaves (biotina más tampón de lavado), las proteínas con etiqueta SBP pueden generarse en un estado relativamente puro con un solo paso de purificación. ^{[ 1 ] [ 3 ] [ 4 ]} Existen varias proteínas de mamíferos relativamente abundantes que se asocian inherentemente con las matrices IMAC que se unen a la etiqueta de polihistidina (etiqueta His) , más comúnmente utilizada . Por esta razón, los protocolos de purificación sin IMAC, incluyendo aquellos con la etiqueta SBP, suelen preferirse para las proteínas que se expresan en células de mamíferos.

Los complejos de proteínas interactuantes también pueden purificarse utilizando la etiqueta SBP porque la elución con biotina permite la recuperación en condiciones en las que los complejos deseados permanecen asociados. Por ejemplo, el complejo de condensina fue purificado por Kim et al. [2010] y los complejos con el coactivador transcripcional TAZ fueron purificados por Zhang et al. [2009]. La etiqueta SBP también se ha incorporado a varios sistemas de purificación por afinidad en tándem (TAP) en los que se utilizan pasos de purificación sucesivos con múltiples etiquetas, por ejemplo, las proteínas de fusión GFP y los complejos de proteína BTK fueron purificados utilizando un protocolo TAP con la etiqueta SBP y la etiqueta His, ^{[ 5 ] [ 6 ]} los complejos de proteína HDGF fueron purificados utilizando un protocolo TAP con la etiqueta SBP y con la etiqueta FLAG ^{[ 7 ]} y los complejos Wnt fueron purificados utilizando un protocolo TAP con la etiqueta SBP y con la etiqueta [ Calmodulina]. ^{[ 8 ]} TAP se usa generalmente con complejos proteicos y varios estudios informan mejoras significativas en pureza y rendimiento cuando los sistemas TAP con SBP-Tag se comparan con sistemas sin SBP-Tag. ^{[ 9 ] [ 10 ] [ 11 ]} Los sistemas TAP comerciales que usan SBP-Tag incluyen los sistemas TAP Interplay® Adenoviral y Mammalian vendidos por Agilent Technologies , productos similares son vendidos por Sigma-Aldrich . ^{[ 12 ]}

Se han realizado análisis de interacciones proteína-proteína biológicamente relevantes utilizando purificación de afinidad en tándem (TAP) con la etiqueta SBP y la proteína A , ^{[ 10 ]} para proteómica de interacción y complejos de factores de transcripción con la etiqueta SBP y la proteína G , ^{[ 10 ] [ 13 ]} para proteínas que interactúan con la proteína DENV-2 NS4A del virus del dengue con la etiqueta SBP y la etiqueta de calmodulina. ^{[ 14 ]} y para proteínas que interactúan con la proteína fosfatasa 2A (PP2A) con la etiqueta SBP y la etiqueta de hemaglutinina (HA). ^{[ 11 ]}

La etiqueta SBP también se unirá a la estreptavidina o a reactivos de estreptavidina en solución. Las aplicaciones de estas asociaciones diseñadas incluyen la visualización de proteínas específicas dentro de células vivas, ^{[ 15 ]} el monitoreo de la cinética de la traducción de proteínas individuales en un sistema de traducción in vitro, ^{[ 16 ]} el control de la integración de una proteína de membrana de múltiples pasos en el retículo endoplasmático mediante la fusión de la etiqueta SBP a la secuencia de translocación N-terminal y luego deteniendo la integración con estreptavidina y reiniciando la integración con biotina. ^{[ 17 ] [ 18 ]} Los reactivos de estreptavidina fluorescentes (por ejemplo, estreptavidina-HRP) se pueden usar para visualizar la etiqueta SBP mediante inmunoblotting de SDS-PAGE. ^{[ 1 ] [ 19 ] [ 20 ]} Además, hay anticuerpos contra la etiqueta SBP disponibles comercialmente.

La etiqueta SBP se ha utilizado para inmovilizar reversiblemente proteínas recombinantes en superficies funcionalizadas con estreptavidina, lo que permite evaluar la interacción mediante técnicas como la resonancia de plasmones superficiales (SPR) y reutilizar la superficie funcionalizada. ^{[ 21 ]} La SPR también se ha utilizado para comparar la etiqueta SBP con otros péptidos de unión a estreptavidina, como Strep-tag . ^{[ 22 ]}