Fraccionamiento celular

En biología celular , el fraccionamiento celular es el proceso utilizado para separar componentes celulares preservando las funciones individuales de cada componente. ^{[ 1 ]} Este método se utilizó originalmente para demostrar la localización celular de diversos procesos bioquímicos . Otros usos del fraccionamiento subcelular incluyen proporcionar una fuente enriquecida de una proteína para su posterior purificación y facilitar el diagnóstico de diversas enfermedades. ^{[ 2 ]}

El tejido se homogeneiza típicamente en una solución tampón isotónica para evitar el daño osmótico. Los mecanismos de homogeneización incluyen molienda, trituración, corte, cambios de presión, choque osmótico , congelación-descongelación y ultrasonido . Las muestras se mantienen frías para evitar el daño enzimático. Es la formación de una masa homogénea de células (homogeneizado celular o suspensión celular ). Implica la molienda de células en un medio adecuado en presencia de ciertas enzimas con el pH, la composición iónica y la temperatura correctos. Por ejemplo, la pectinasa , que digiere la lámina media entre las células vegetales.

Este paso puede no ser necesario dependiendo del origen de las células . Sin embargo, es probable que el tejido animal contenga tejido conectivo, el cual debe eliminarse. Generalmente, la filtración se realiza vertiendo la muestra a través de una gasa o utilizando un filtro de succión y el filtro cerámico del grado adecuado.

La purificación se logra mediante centrifugación diferencial : el aumento secuencial de la fuerza gravitacional da como resultado la separación secuencial de los orgánulos según su densidad .

• alteración celular

Medios para la separación celular por densidad:

• Percoll
• Ficoll