Hispanopedia WikiEl tampón TAE es una solución tampón que contiene una mezcla de base Tris , ácido acético y EDTA .
En biología molecular, se utiliza en electroforesis de agarosa típicamente para la separación de ácidos nucleicos como ADN y ARN . [1] Está compuesto de tampón Tris-acetato , generalmente a pH 8,3, y EDTA , que secuestra cationes divalentes. El TAE tiene una capacidad tampón menor que el TBE y puede agotarse fácilmente, pero el ADN lineal de doble cadena se procesa más rápido en TAE.
Anteriormente, Brody y Kern simplificaron los tampones electroforéticos sustituyendo los tampones TBE y TAE por medios conductores más eficientes y económicos en sistemas de gel. [2]
Usos
El tampón TAE (Tris-acetato-EDTA) se utiliza como tampón de ejecución y en geles de agarosa. [3] También se ha descrito su uso en métodos de electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante para el análisis de mutaciones de amplio espectro. [4] El TAE se ha utilizado en diversas concentraciones para estudiar la movilidad del ADN en solución con y sin cloruro de sodio . [5] Sin embargo, las altas concentraciones de cloruro de sodio (y muchas otras sales) en una muestra de ADN retardan su movilidad. Esto puede conducir a interpretaciones incorrectas del patrón de bandas de ADN resultante.
Preparación
El tampón TAE se prepara habitualmente como una solución madre 50× para uso en laboratorio. Se puede preparar una solución madre 50× disolviendo 242 g de base Tris en agua, añadiendo 57,1 ml de ácido acético glacial y 100 ml de solución de EDTA 500 mM (pH 8,0) y llevando el volumen final hasta 1 litro. Esta solución madre se puede diluir 49:1 con agua para preparar una solución de trabajo 1×. Esta solución 1× contendrá 40 mM de Tris, 20 mM de ácido acético y 1 mM de EDTA.
2 M = 2000 mM, por lo que 2000 mM /50 = 40 mM para 1×.
1 M = 1000 mM, por lo que 1000 mM /50 = 20 mM para 1×.
50 mM /50 = 1 mM para 1×.
En primer lugar, estos ingredientes deben disolverse en 500 ml y luego completarse hasta 1000 ml.
Nota: el EDTA tardará más en disolverse, por lo que al disolverlo, use un agitador magnético (algunas cantidades de EDTA en 3 o 4 veces).
Una receta paso a paso del método de preparación del tampón TAE 50× está disponible en protocols.io. [6]
Véase también
Referencias
- ^ Ogden, RC y Adams, DA, (1987) Electroforesis en geles de agarosa y acrilamida. Métodos Enzymol ., 152 :, 61-87.
- ^ Brody, JR, Kern, SE (2004) Historia y principios de los medios conductores para la electroforesis de ADN estándar. Anal Biochem. 333(1):1-13. doi :10.1016/j.ab.2004.05.054 PMID 15351274 PDF
- ^ Sambrook, Fritsch y Maniatis (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual , 2.ª ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, volumen 3, apéndices B.11 y B.23 ISBN 0-87969-309-6
- ^ Hayes, VM et al., (1999) Mejoras en la composición del gel y las condiciones electroforéticas para el análisis de mutaciones de amplio espectro mediante electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante. Nucleic Acids Res ., 27 (20): e29. PMID 10497279
- ^ Stellwagen, E., y Stellwagen, NC (2002) La movilidad en solución libre del ADN en tampones Tris-acetato-EDTA de diferentes concentraciones, con y sin NaCl añadido. Electroforesis , 23 (12): 1935-1941. PMID 12116139
- ^ Behle, Anna; Pawlowski, Alice (6 de abril de 2018). "Receta para tampón TAE 50x". doi :10.17504/protocols.io.gtvbwn6.
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