Hispanopedia WikiTBE o Tris/Borato/EDTA , es una solución tampón que contiene una mezcla de base Tris , ácido bórico y EDTA .
En biología molecular, los tampones TBE y TAE se utilizan a menudo en procedimientos que involucran ácidos nucleicos , siendo el más común la electroforesis . Las soluciones de tris -ácido son tampones efectivos para condiciones ligeramente básicas, que mantienen el ADN desprotonado y soluble en agua. El EDTA es un quelante de cationes divalentes , particularmente de magnesio (Mg 2+ ). Como estos iones son cofactores necesarios para muchas enzimas, incluidas las nucleasas contaminantes , el papel del EDTA es proteger los ácidos nucleicos contra la degradación enzimática. Pero como el Mg 2+ también es un cofactor para muchas enzimas útiles modificadoras de ADN, como las enzimas de restricción y las ADN polimerasas , su concentración en tampones TBE o TAE generalmente se mantiene baja (típicamente alrededor de 1 mM ).
Se han descubierto sustitutos más recientes de los tampones TBE y TAE para electroforesis. [1]
Receta (1 litro de solución madre 5X)
- 54 g de base Tris (CAS# 77-86-1, base libre)
- 27,5 g de ácido bórico (CAS# 10043-35-3)
- 20 ml de EDTA 0,5 M (CAS# 60-00-4) ( pH 8,0)
Ajustar el pH a 8,3 con HCl. [2]
El TBE se puede diluir a 1X antes de su uso en electroforesis; también es aceptable una concentración de 0,5x. Concentraciones más altas darán como resultado resultados deficientes debido a la generación excesiva de calor.
Véase también
- Tampón LB , tampón de borato de litio, un tampón similar que contiene iones de litio en lugar de Tris
- Tampón TAE , un tampón similar que contiene ácido acético en lugar de ácido bórico
Referencias
- ^ Brody, JR; Kern, SE (2004). "Historia y principios de los medios conductores para la electroforesis estándar de ADN" (PDF) . Anal Biochem . 333 (1): 1–13. doi :10.1016/j.ab.2004.05.054. PMID 15351274.
- ^ https://web.archive.org/web/20171107223153/https://www.eeb.ucla.edu/Faculty/Barber/Web%20Protocols/Protocol7.pdf [ URL básica PDF ]
