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Imágenes de células vivas

Un microscopio para células vivas. Los microscopios para células vivas suelen ser invertidos . Para mantener las células vivas durante la observación, los microscopios se coloca...

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Un microscopio para células vivas. Los microscopios para células vivas suelen ser invertidos . Para mantener las células vivas durante la observación, los microscopios se colocan comúnmente dentro de una microincubadora celular (la caja transparente).

La microscopía de células vivas es el estudio de células vivas mediante microscopía de lapso de tiempo . Los científicos la utilizan para comprender mejor la función biológica a través del estudio de la dinámica celular. [ 1 ] La microscopía de células vivas se desarrolló por primera vez en la primera década del siglo XXI. Una de las primeras películas microcinematográficas de células en lapso de tiempo fue realizada por Julius Ries, mostrando la fertilización y el desarrollo del óvulo de erizo de mar . [ 2 ] Desde entonces, se han desarrollado varios métodos de microscopía para estudiar células vivas con mayor detalle y menor esfuerzo. Se ha utilizado un nuevo tipo de imagen mediante puntos cuánticos , ya que se ha demostrado que son más estables. [ 3 ] El desarrollo de la microscopía holotomográfica ha superado la fototoxicidad y otras desventajas derivadas de la tinción mediante la implementación de tinción digital basada en el índice de refracción de las células. [ 4 ] [ 5 ]

Descripción general

Los sistemas biológicos existen como una compleja interacción de innumerables componentes celulares que interactúan en cuatro dimensiones para producir el fenómeno llamado vida. Si bien es común reducir los organismos vivos a muestras no vivas para adaptarlos a las herramientas de imagen estáticas tradicionales, cuanto más se desvía la muestra de las condiciones nativas, mayor es la probabilidad de que los delicados procesos en cuestión presenten perturbaciones. [ 6 ] La ardua tarea de capturar la verdadera identidad fisiológica del tejido vivo, por lo tanto, requiere una visualización de alta resolución tanto en el espacio como en el tiempo dentro del organismo progenitor. [ 7 ] Los avances tecnológicos de la imagen de células vivas, diseñados para proporcionar imágenes espaciotemporales de eventos subcelulares en tiempo real, desempeñan un papel importante para corroborar la relevancia biológica de los cambios fisiológicos observados durante la experimentación. Debido a su relación contigua con las condiciones fisiológicas, los ensayos de células vivas se consideran el estándar para investigar eventos celulares complejos y dinámicos. [ 8 ] A medida que los procesos dinámicos como la migración , el desarrollo celular y el tráfico intracelular se convierten cada vez más en el foco de la investigación biológica, las técnicas capaces de capturar datos tridimensionales en tiempo real para redes celulares ( in situ ) y organismos completos ( in vivo ) se convertirán en herramientas indispensables para comprender los sistemas biológicos. La aceptación general de la microscopía de células vivas ha llevado a una rápida expansión en el número de profesionales y ha establecido la necesidad de una mayor resolución espacial y temporal sin comprometer la salud de la célula. [ 9 ]

Tipos de microscopía utilizados

Contraste de fase

Vídeo de microscopía de contraste de fase en cámara rápida de espermatocitos de saltamontes en división . Esta película histórica, que popularizó la microscopía de contraste de fase, fue realizada a principios de la década de 1940 por Kurt Michel de la compañía Carl Zeiss . [ 10 ]

Antes de la introducción del microscopio de contraste de fase , era difícil observar células vivas. Como las células vivas son translúcidas, deben teñirse para ser visibles en un microscopio óptico tradicional . Desafortunadamente, el proceso de tinción de células generalmente las mata. Con la invención de la microscopía de contraste de fase, fue posible observar células vivas sin teñir en detalle. Después de su introducción en la década de 1940, la obtención de imágenes de células vivas se popularizó rápidamente utilizando la microscopía de contraste de fase. [ 11 ] El microscopio de contraste de fase se popularizó a través de una serie de películas de lapso de tiempo (ver video), grabadas con una cámara fotográfica de película. [ 12 ] Su inventor, Frits Zernike , fue galardonado con el Premio Nobel en 1953. [ 13 ] Otras técnicas de contraste de fase posteriores utilizadas para observar células sin teñir son la modulación de Hoffman y la microscopía de contraste de interferencia diferencial .

Fluorescente

Vídeo de microscopía de fluorescencia en cámara rápida de un embrión de erizo de mar púrpura en división . [ 14 ]

La microscopía de contraste de fase no tiene la capacidad de observar proteínas específicas u otros compuestos químicos orgánicos que forman la compleja maquinaria de una célula. Por lo tanto, se han desarrollado tinciones fluorescentes sintéticas y orgánicas para marcar dichos compuestos, haciéndolos observables mediante microscopía de fluorescencia (ver video). [ 15 ] Sin embargo, las tinciones fluorescentes son fototóxicas , invasivas y se decoloran al observarse. Esto limita su uso al observar células vivas durante períodos prolongados. Por consiguiente, las técnicas de contraste de fase no invasivas se utilizan a menudo como un complemento vital de la microscopía de fluorescencia en aplicaciones de imágenes de células vivas. [ 16 ] [ 17 ] Sin embargo, los métodos de microscopía de fluorescencia asistidos por aprendizaje profundo ayudan a reducir la carga lumínica y la fototoxicidad, y permiten incluso la obtención repetida de imágenes de células vivas de alta resolución. [ 18 ]

Contraste de fase cuantitativo

Vídeo de microscopía de contraste de fase cuantitativa de células de cáncer de mama en división. [ 19 ]

Como resultado del rápido aumento en la densidad de píxeles de los sensores de imagen digital , la microscopía cuantitativa de contraste de fase ha surgido como un método de microscopía alternativo para la obtención de imágenes de células vivas. [ 20 ] [ 21 ] La microscopía cuantitativa de contraste de fase tiene una ventaja sobre la microscopía de fluorescencia y de contraste de fase en que es no invasiva y cuantitativa por naturaleza.

Debido a la estrecha profundidad de campo de la microscopía convencional, la obtención de imágenes de células vivas se limita actualmente, en gran medida, a la observación de células en un solo plano. La mayoría de las implementaciones de microscopía cuantitativa de contraste de fase permiten crear y enfocar imágenes en diferentes planos focales a partir de una sola exposición. Esto abre la posibilidad futura de obtener imágenes tridimensionales de células vivas mediante técnicas de fluorescencia. [ 22 ] La microscopía cuantitativa de contraste de fase con escaneo rotacional permite adquirir imágenes tridimensionales de células vivas en lapso de tiempo con alta resolución. [ 23 ] [ 24 ] [ 4 ]

Holotomografía

La holotomografía (HT) es una técnica láser para medir el tomograma tridimensional del índice de refracción (IR) de una muestra microscópica, como células y tejidos biológicos. Dado que el IR puede servir como contraste de imagen intrínseco para objetos transparentes o de fase, las mediciones de tomogramas de IR permiten obtener imágenes cuantitativas sin marcadores de objetos de fase microscópicos. Para medir el tomograma 3D del IR de las muestras, la HT emplea el principio de imagen holográfica y dispersión inversa . Normalmente, se miden múltiples imágenes holográficas 2D de una muestra en varios ángulos de iluminación, utilizando el principio de imagen interferométrica. A continuación, se reconstruye un tomograma 3D del IR de la muestra a partir de estas múltiples imágenes holográficas 2D mediante la resolución inversa de la dispersión de la luz en la muestra.

El principio de la tomografía de Helmholtz (TH) es muy similar al de la tomografía computarizada ( TC ) de rayos X. La TC mide múltiples imágenes de rayos X en 2D del cuerpo humano desde diferentes ángulos de iluminación, y posteriormente se obtiene un tomograma en 3D (absortividad de rayos X) mediante la teoría de dispersión inversa. Tanto la TC de rayos X como la TH láser comparten la misma ecuación fundamental: la ecuación de Helmholtz , la ecuación de onda para una longitud de onda monocromática. La TH también se conoce como tomografía de difracción óptica.

La combinación de holografía y escaneo rotacional permite realizar grabaciones de células vivas a largo plazo y sin necesidad de marcadores.

La nanoscopía óptica no invasiva puede lograr dicha resolución lateral mediante un esquema de detección cuasi- 2π -holográfica y una deconvolución compleja. Las frecuencias espaciales de la célula analizada carecen de sentido para el ojo humano. Sin embargo, estas frecuencias dispersas se convierten en un holograma y sintetizan un paso de banda con una resolución que duplica la disponible normalmente. Los hologramas se registran desde diferentes direcciones de iluminación en el plano de la muestra y permiten observar variaciones tomográficas sublongitudinales del espécimen. Las aperturas a nanoescala sirven para calibrar la reconstrucción tomográfica y caracterizar el sistema de imagen mediante la función de transferencia coherente. Esto da lugar a un filtrado inverso realista y garantiza una reconstrucción de campo complejo precisa. [ 24 ]

En conclusión, las dos terminologías de (i) resolución óptica (la real) y (ii) resolución de muestreo (la que se muestra en la pantalla) se separan para la microscopía holotomográfica 3D.

Instrumentación y óptica

La microscopía de células vivas representa un delicado equilibrio entre la obtención de la imagen de mayor resolución y el mantenimiento de las células vivas durante el mayor tiempo posible. [ 25 ] Como resultado, los microscopistas de células vivas se enfrentan a una serie de desafíos únicos que a menudo se pasan por alto al trabajar con muestras fijas. Además, la microscopía de células vivas suele emplear sistemas ópticos y detectores con especificaciones especiales. Por ejemplo, idealmente, los microscopios utilizados en la microscopía de células vivas tendrían altas relaciones señal-ruido , altas velocidades de adquisición de imágenes para capturar vídeos de lapso de tiempo de eventos extracelulares y el mantenimiento de la viabilidad a largo plazo de las células. [ 26 ] Sin embargo, optimizar incluso un solo aspecto de la adquisición de imágenes puede requerir muchos recursos y debe considerarse caso por caso.

Diseños de lentes

A) Configuración de lente vertical. B) Configuración de lente invertida.

Imagen "seca" de baja magnificación

En los casos en que se requiere espacio adicional entre el objetivo y la muestra para trabajar con ella, se puede utilizar una lente seca, lo que podría requerir ajustes adicionales del anillo de corrección, que cambia la posición de la lente en el objetivo, para compensar las diferencias en las cámaras de imagen. Las lentes objetivo especiales están diseñadas con anillos de corrección que corrigen las aberraciones esféricas teniendo en cuenta el grosor del cubreobjetos. En las lentes objetivo secas de alta apertura numérica (NA), el anillo de ajuste del anillo de corrección cambia la posición de un grupo de lentes móviles para compensar las diferencias en la forma en que el exterior de la lente enfoca la luz con respecto al centro. Si bien las aberraciones de las lentes son inherentes a todos los diseños de lentes, se vuelven más problemáticas en las lentes secas, donde la retención de la resolución es fundamental. [ 27 ]

Inmersión en aceite de alta apertura numérica

La inmersión en aceite es una técnica que puede aumentar la resolución de la imagen al sumergir la lente y la muestra en aceite con un alto índice de refracción . Dado que la luz se desvía al pasar entre medios con diferentes índices de refracción, al colocar aceite con el mismo índice de refracción que el vidrio entre la lente y la muestra, se pueden evitar dos transiciones entre índices de refracción. [ 28 ] Sin embargo, para la mayoría de las aplicaciones se recomienda utilizar la inmersión en aceite con muestras fijas (muertas) porque las células vivas requieren un entorno acuoso, y la mezcla de aceite y agua puede causar graves aberraciones esféricas. Para algunas aplicaciones se puede utilizar aceite de silicona para producir reconstrucciones de imagen más precisas. El aceite de silicona es un medio atractivo porque tiene un índice de refracción cercano al de las células vivas, lo que permite producir imágenes de alta resolución minimizando las aberraciones esféricas. [ 27 ]

Inmersión en agua

La microscopía de células vivas requiere una muestra en un medio acuoso, generalmente a una  distancia de entre 50 y 200 micrómetros del cubreobjetos. Por lo tanto, los objetivos de inmersión en agua permiten alcanzar una mayor resolución, ya que tanto el medio como las células se encuentran cerca del índice de refracción del agua. Estos objetivos están diseñados para ser compatibles con dicho índice y suelen incorporar un anillo corrector que permite ajustar el objetivo. Además, debido al mayor índice de refracción del agua, los objetivos de inmersión en agua poseen una alta apertura numérica y pueden producir imágenes superiores a las de los objetivos de inmersión en aceite al analizar planos con profundidades mayores a 0  μm. [ 27 ]

Inmersión

Otra solución para la obtención de imágenes de células vivas es la lente de inmersión. Estas lentes son un subconjunto de las lentes de inmersión en agua que no requieren cubreobjetos y pueden sumergirse directamente en el medio acuoso de la muestra. Una de las principales ventajas de la lente de inmersión es su gran distancia de trabajo efectiva. [ 29 ] Dado que no se requiere un cubreobjetos, este tipo de lente puede acercarse a la superficie de la muestra y, como resultado, la resolución está limitada por las restricciones impuestas por la aberración esférica en lugar de las limitaciones físicas del cubreobjetos. Si bien las lentes de inmersión pueden ser muy útiles, no son ideales para todos los experimentos, ya que el acto de "sumergir" la lente puede perturbar las células de la muestra. Además, dado que la cámara de incubación debe estar abierta a la lente, los cambios en el entorno de la muestra debido a la evaporación deben controlarse cuidadosamente. [ 27 ]

Fototoxicidad y fotoblanqueamiento

Actualmente, la mayoría de las técnicas de imagen en tiempo real se basan en regímenes de alta iluminación o en el marcaje fluorescente, lo que induce fototoxicidad y compromete la capacidad de mantener las células intactas y vivas a lo largo del tiempo. Dado que nuestro conocimiento de la biología se basa en la observación, es fundamental minimizar las perturbaciones inducidas por la técnica de imagen.

El auge de la microscopía confocal está estrechamente relacionado con la accesibilidad a láseres de alta potencia, capaces de alcanzar altas intensidades de excitación lumínica. Sin embargo, la alta potencia de salida puede dañar los fluoróforos sensibles , por lo que los láseres suelen funcionar a una potencia significativamente inferior a su potencia máxima. [ 30 ] La sobreexposición a la luz puede provocar fotodaño debido al fotoblanqueo o la fototoxicidad . Los efectos del fotoblanqueo pueden reducir significativamente la calidad de las imágenes fluorescentes, y en los últimos años ha habido una demanda considerable de fluoróforos comerciales de mayor duración. Una solución, la serie Alexa Fluor , muestra poca o ninguna decoloración incluso a altas intensidades de láser. [ 31 ]

En condiciones fisiológicas, muchos tipos de células y tejidos están expuestos a niveles bajos de luz. [ 32 ] Por lo tanto, es importante minimizar la exposición de las células vivas a altas dosis de luz ultravioleta (UV), infrarroja (IR) o longitudes de onda de excitación de fluorescencia, que pueden dañar el ADN , elevar la temperatura celular y causar fotoblanqueamiento, respectivamente. [ 33 ] Los fotones de alta energía absorbidos por los fluoróforos y la muestra se emiten en longitudes de onda más largas proporcionales al desplazamiento de Stokes . [ 34 ] Sin embargo, los orgánulos celulares pueden dañarse cuando la energía del fotón produce cambios químicos y moleculares en lugar de ser reemitida. [ 35 ] Se cree que el principal culpable de la toxicidad inducida por la luz que experimentan las células vivas es el resultado de los radicales libres producidos por la excitación de moléculas fluorescentes. [ 32 ] Estos radicales libres son altamente reactivos y causan la destrucción de componentes celulares, lo que puede resultar en un comportamiento no fisiológico.

One method of minimizing photo-damage is to lower the oxygen concentration in the sample to avoid the formation of reactive oxygen species.[36] However, this method is not always possible in live-cell imaging and may require additional intervention. Another method for reducing the effects of free radicals in the sample is the use of antifade reagents. Unfortunately, most commercial antifade reagents cannot be used in live-cell imaging because of their toxicity.[37] Instead, natural free-radical scavengers such as vitamin C or vitamin E can be used without substantially altering physiological behavior on shorter time scales.[38] Phototoxicity-free live-cell imaging has recently been developed and commercialised. Holotomographic microscopy avoids phototoxicity thanks to its low-power laser (laser class 1: 0.2 mW/mm2).[4][5][39]

See also

References

  1. ↑Baker M (August 2010). "Cellular imaging: Taking a long, hard look". Nature. 466 (7310): 1137–1140. Bibcode:2010Natur.466.1137B. doi:10.1038/4661137a. PMID 20740018. S2CID 205056946.
  2. ↑Landecker H (October 2009). "Seeing things: from microcinematography to live cell imaging". Nature Methods. 6 (10): 707–709. doi:10.1038/nmeth1009-707. PMID 19953685. S2CID 6521488.
  3. ↑Jaiswal JK, Goldman ER, Mattoussi H, Simon SM (October 2004). "Use of quantum dots for live cell imaging". Nature Methods. 1 (1): 73–78. doi:10.1038/nmeth1004-73. PMID 16138413. S2CID 13339279.
  4. 123Pollaro, L.; Equis, S.; Dalla Piazza, B.; Cotte, Y. (2016). "Stain-free 3D Nanoscopy of Living Cells". Optik & Photonik. 11: 38–42. doi:10.1002/opph.201600008.
  5. 1 2 Pollaro, L.; Dalla Piazza, B.; Cotte, Y. (2015). "Tinción digital: microscopía de células vivas sin productos químicos invasivos" (PDF) . Microscopy Today . 23 (4): 12– 17. doi : 10.1017/S1551929515000590 . S2CID 135982205 . 
  6. ↑ Petroll, WM; Jester, JV; Cavanagh, HD (mayo de 1994). "Imágenes confocales in vivo: principios generales y aplicaciones". Scanning . 16 (3): 131– 149. ISSN 0161-0457 . PMID 8038913 .  
  7. ↑ Meijering, Erik; Dzyubachyk, Oleh; Smal, Ihor (2012-01-01). «Métodos para el seguimiento de células y partículas». Imágenes y análisis espectroscópico de células vivas: técnicas ópticas y espectroscópicas . Métodos en enzimología. Vol. 504. págs. 183–200 . doi : 10.1016/B978-0-12-391857-4.00009-4 . ISBN   9780123918574ISSN 0076-6879 . PMID 22264535. Archivado del original el 5 de mayo de 2022. Consultado el 2 de diciembre de 2019 .  
  8. ↑ Allan, Victoria J.; Stephens, David J. (2003-04-04). "Técnicas de microscopía óptica para la obtención de imágenes de células vivas". Science . 300 (5616): 82– 86. Bibcode : 2003Sci...300...82S . CiteSeerX 10.1.1.702.4732 . doi : 10.1126/science.1082160 . ISSN 1095-9203 . PMID 12677057 . S2CID 33199613 .    
  9. ↑ Dance, Amber (27 de marzo de 2018). "Imágenes de células vivas: más profundas, más rápidas, más amplias" . Science . AAAS . Consultado el 17 de diciembre de 2018 .
  10. ↑ Michel K (junio de 2013). "Película histórica en cámara rápida del Dr. Kurt Michel, Carl Zeiss Jena (ca. 1943)" . Biblioteca de microscopía Zeiss.
  11. ↑ Burgess M (15 de octubre de 2003). "Celebrando 50 años de imágenes de células vivas" (PDF) . Carl Zeiss UK y The Royal Microscopical Society . Londres: The Biochemical Society.
  12. ↑ Gundlach H. «Hace 50 años: Frits Zernike (1888-1966) recibió el Premio Nobel de Física por el desarrollo del método de contraste de fase» (PDF) (Comunicado de prensa). Carl Zeiss AG. Archivado del original (PDF) el 22 de marzo de 2014.
  13. ↑ "El Premio Nobel de Física de 1953" . Nobel Media AB.
  14. ^ von Dassow G, Verbrugghe KJ, Miller AL, Sider JR, Bement WM. "División celular en embrión de erizo morado" . The Cell : una biblioteca de imágenes.
  15. ↑ Stockert JC, Blázquez-Castro A (2017). Microscopía de fluorescencia en ciencias de la vida . Bentham Science Publishers. ISBN 978-1-68108-519-7Consultado el 24 de diciembre de 2017 .
  16. ↑ Stephens DJ, Allan VJ (abril de 2003). "Técnicas de microscopía óptica para la obtención de imágenes de células vivas". Science . 300 (5616): 82– 86. Bibcode : 2003Sci...300...82S . CiteSeerX 10.1.1.702.4732 . doi : 10.1126/science.1082160 . PMID 12677057 . S2CID 33199613 .   
  17. ↑ Ge J, Wood DK, Weingeist DM, Prasongtanakij S, Navasumrit P, Ruchirawat M, Engelward BP (junio de 2013). " La obtención de imágenes fluorescentes estándar de células vivas es altamente genotóxica" . Cytometry. Part A. 83 ( 6): 552–560 . doi : 10.1002/cyto.a.22291 . PMC 3677558. PMID 23650257 .  
  18. ^ Velicky P, Miguel E, Michalska JM, Lyudchik J, Wei D, Lin Z, Watson JF, Troidl J, Beyer J, Ben-Simon Y, Sommer C, Jahr W, Cenameri A, Broichhagen J, Grant S, Jonas P, Novarino G, Pfister H, Bickel B, Danzl JG (julio de 2023). "Reconstrucción densa a nanoescala 4D de tejido cerebral vivo" . Métodos de la naturaleza . 20 (8): 1256– 1265. doi : 10.1038/s41592-023-01936-6 . PMC 10406607 . PMID 37429995 .  
  19. ↑ Janicke B. "Vídeo de microscopía holográfica digital que muestra la división celular de células de cáncer de mama JIMT-1 sin marcar" . The Cell — una biblioteca de imágenes.
  20. ↑Park Y, Depeursinge C, Popescu, G (2018). "Quantitative phase imaging in biomedicine". Nature Photonics. 12 (10): 578–589. Bibcode:2018NaPho..12..578P. doi:10.1038/s41566-018-0253-x. PMID 26648557. S2CID 126144855.
  21. ↑Cuche E, Bevilacqua F, Depeursinge C (1999). "Digital holography for quantitative phase-contrast imaging". Optics Letters. 24 (5): 291–293. Bibcode:1999OptL...24..291C. doi:10.1364/OL.24.000291. PMID 18071483. S2CID 38085266.
  22. ↑Rosen J, Brooker G (2008). "Non-scanning motionless fluorescence three-dimensional holographic microscopy". Nature Photonics. 2 (3): 190–195. Bibcode:2008NaPho...2..190R. doi:10.1038/nphoton.2007.300. S2CID 17818065.
  23. ↑Wonshik C, Fang-Yen C, Badizadegan K, Oh S, Lue N, Dasari R, Feld M (2007). "Tomographic phase microscopy". Nature Methods. 4 (9): 717–719. doi:10.1038/nmeth1078. PMID 17694065. S2CID 205418034.
  24. 12Cotte Y, Toy F, Jourdain P, Pavillon N, Boss D, Magistretti P, Marquet P, Depeursinge C (2013). "Marker-free phase nanoscopy". Nature Photonics. 7 (2): 113–117. Bibcode:2013NaPho...7..113C. doi:10.1038/nphoton.2012.329. S2CID 16407188.
  25. ↑Jensen EC (January 2013). "Overview of live-cell imaging: requirements and methods used". Anatomical Record. 296 (1): 1–8. doi:10.1002/ar.22554. PMID 22907880. S2CID 35790454.
  26. ↑ Waters JC (2013). "Imágenes de fluorescencia de células vivas". Microscopía digital . Métodos en biología celular. Vol. 114. págs. 125–150 . doi : 10.1016/B978-0-12-407761-4.00006-3 . ISBN   9780124077614. PMID 23931505 . 
  27. 1 2 3 4 Hibbs AR (2004). Microscopía confocal para biólogos . Nueva York: Kluwer Academic/Plenum Publishers. ISBN 978-0306484681OCLC 54424872​​ 
  28. ↑ Mansfield SM, Kino GS (1990-12-10). "Microscopio de inmersión sólida". Applied Physics Letters . 57 (24): 2615– 2616. Bibcode : 1990ApPhL..57.2615M . doi : 10.1063/1.103828 .
  29. ↑ Keller HE (2006), "Objective Lenses for Confocal Microscopy", Handbook of Biological Confocal Microscopy , Springer US, pp. 145–161 , doi : 10.1007/978-0-387-45524-2_7 , ISBN  9780387259215, S2CID 34412257 
  30. ↑ Amos, WB; White, JG (2003-09-01). "Cómo el microscopio confocal de barrido láser entró en la investigación biológica" . Biology of the Cell . 95 (6): 335– 342. doi : 10.1016/S0248-4900(03)00078-9 . PMID 14519550. S2CID 34919506 .  
  31. ↑ Anderson GP, ​​Nerurkar NL (2002-12-20). "Inmunoensayos de fluorescencia mejorados utilizando el colorante Alexa Fluor 647 con el RAPTOR, un biosensor de fibra óptica 7". Journal of Immunological Methods . 271 ( 1– 2): 17– 24. doi : 10.1016/S0022-1759(02)00327-7 . ISSN 0022-1759 . PMID 12445725 .  
  32. 1 2 Frigault MM, Lacoste J, Swift JL, Brown CM (marzo de 2009). "Microscopía de células vivas: consejos y herramientas" . Journal of Cell Science . 122 (Pt 6): 753–767 . doi : 10.1242/jcs.033837 . PMID 19261845 . 
  33. ↑ Magidson V, Khodjakov A (2013). "Cómo evitar el fotodaño en la microscopía de células vivas". Microscopía digital . Métodos en biología celular. Vol. 114. págs. 545–560 . doi : 10.1016/B978-0-12-407761-4.00023-3 . ISBN   9780124077614. PMC 3843244 . PMID 23931522 .  
  34. ↑ Rost FW (1992–1995). Microscopía de fluorescencia . Cambridge: Cambridge University Press. ISBN 978-0521236416OCLC 23766227​​ 
  35. ↑ Laissue PP, Alghamdi RA, Tomancak P, Reynaud EG, Shroff H (junio de 2017). "Evaluación de la fototoxicidad en imágenes de fluorescencia en vivo". Nature Methods . 14 (7): 657– 661. doi : 10.1038/nmeth.4344 . hdl : 21.11116/0000-0002-8B80-0 . PMID 28661494. S2CID 6844352 .  
  36. ↑ Ettinger A, Wittmann T (2014). "Imágenes de células vivas por fluorescencia". Imágenes cuantitativas en biología celular . Métodos en biología celular. Vol. 123. pp. 77–94 . doi : 10.1016/B978-0-12-420138-5.00005-7 . ISBN   9780124201385. PMC 4198327 . PMID 24974023 .  
  37. ↑ Pawley JB (2006). Manual de microscopía confocal biológica (3.ª ed.). Nueva York, NY: Springer. ISBN  9780387455242OCLC 663880901​​ 
  38. ↑ Watu A, Metussin N, Yasin HM, Usman A (2018). "Capacidad antioxidante total e imágenes de fluorescencia de hojas de plantas seleccionadas comúnmente consumidas en Brunei Darussalam" . AIP Conference Proceedings . 1933 (1): 020001. Bibcode : 2018AIPC.1933b0001W . doi : 10.1063/1.5023935 .
  39. ↑ Sandoz, Patrick A.; Tremblay, Christopher; Equis, Sebastien; Pop, Sorin; Pollaro, Lisa; Cotte, Yann; van der Goot, F. Gisou; Frechin, Mathieu (2018-09-04). "Análisis 3D sin marcadores de orgánulos en células vivas mediante índice de refracción muestra el giro de orgánulos premitóticos en células madre de mamíferos". bioRxiv 10.1101/407239 . 
  • Universidad Estatal de Florida — Introducción a las técnicas de imagen de células vivas
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