Estreptámero

Strep Tamer es una tecnología que permite el aislamiento y tinción reversible de células T específicas de antígeno . Esta tecnología combina un método actual de aislamiento de células T con la tecnología Strep-Tag . En principio, las células T se separan estableciendo una interacción específica entre la célula T de interés y una molécula , que se conjuga a un marcador que permite el aislamiento. La reversibilidad de esta interacción y las bajas temperaturas a las que se realiza permiten el aislamiento y caracterización de células T funcionales. Debido a que las células T permanecen fenotípicamente y funcionalmente indistinguibles de las células no tratadas, este método ofrece estrategias modernas en la investigación clínica y básica de células T. ^[1]

Las células T desempeñan un papel importante en el sistema inmunitario adaptativo . Son capaces de orquestar, regular y coordinar respuestas inmunitarias complejas. Una amplia gama de aspectos clínicamente relevantes están asociados con la función o el mal funcionamiento de las células T: enfermedades autoinmunes , control de patógenos virales o bacterianos , desarrollo de cáncer o respuestas de injerto contra huésped. En los últimos años, se han desarrollado varios métodos ( ensayo ELISpot , tinción de citocinas intracelulares, ensayo de secreción ) para la identificación de células T, pero solo los procedimientos del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) permiten la identificación y purificación de células T específicas de antígeno independientemente de su estado funcional.

En principio, los procedimientos MHC utilizan el ligando del receptor de células T (TCR) , que es el complejo MHC-péptido, como sonda de tinción. El MHC interactúa con el TCR, que a su vez se expresa en las células T. Debido a que las interacciones TCR-MHC solo tienen una afinidad muy débil entre sí, los complejos monoméricos MHC-epítopo no pueden proporcionar una unión estable. Este problema se puede resolver utilizando epítopos MHC multimerizados, lo que aumenta la avidez de unión y, por lo tanto, permite una unión estable. Los fluorocromos conjugados con los multímeros MHC se pueden utilizar para la identificación de células T mediante citometría de flujo . Hoy en día, las moléculas MHC se pueden producir de forma recombinante junto con los péptidos antigénicos que se conocen para un número cada vez mayor de enfermedades.

El principio de tinción Streptamer combina el método clásico de aislamiento de células T mediante multímeros MHC con la tecnología Strep-tag /Strep-Tactin. El Strep -tag es una secuencia peptídica corta que muestra una afinidad de unión moderada por el sitio de unión de la biotina de una molécula de estreptavidina mutada , llamada Strep-Tactin. Para la tecnología Streptamer, las moléculas Strep-Tactin se multimerizan y forman la "columna vertebral", creando así una plataforma para la unión a las proteínas marcadas con estreptococos . Además, la columna vertebral Strep-Tactin tiene una etiqueta fluorescente para permitir el análisis por citometría de flujo . La incubación de las proteínas de fusión MHC-Strep-tag con la columna vertebral Strep-Tactin da como resultado la formación de un multímero MHC, que es capaz de realizar la tinción específica de antígenos de las células T.

Debido a que la molécula d-biotina tiene una afinidad mucho mayor por Strep-Tactin que Strep-tag, puede competir eficazmente por el sitio de unión . ^{[2] [3]} Por lo tanto, un multímero MHC basado en la interacción de Strep-tag con Strep-Tactin se altera fácilmente en presencia de concentraciones relativamente bajas de d-biotina. Sin la estructura principal de Strep-Tactin, las proteínas de fusión individuales MHC-Strep-tag se desprenden espontáneamente del TCR de la célula T, debido a las débiles afinidades de unión (los complejos monoméricos MHC-epítopo no pueden proporcionar una unión estable, ver arriba).