Tinción tricrómica

La tinción tricrómica es un método de tinción histológica que utiliza dos o más colorantes ácidos junto con un poliácido . Esta tinción diferencia los tejidos al teñirlos con colores contrastantes. Aumenta el contraste de las características microscópicas en células y tejidos , lo que facilita su visualización al microscopio .

La palabra tricrómico significa "tres colores". El primer protocolo de tinción descrito como "tricrómico" fue la tinción tricrómica de Mallory , que tiñe diferencialmente los eritrocitos de rojo, el tejido muscular de rojo y el colágeno de azul. Otros protocolos de tinción tricrómica son la tinción tricrómica de Masson , la de Lillie y la de Gömöri .

Sin tinción tricrómica, distinguir una característica de otra puede ser extremadamente difícil. El tejido muscular liso , por ejemplo, es difícil de diferenciar del colágeno. Una tinción tricrómica puede teñir el tejido muscular de rojo y las fibras de colágeno de verde o azul. Las biopsias hepáticas pueden presentar finas fibras de colágeno entre las células hepáticas, y la cantidad de colágeno puede estimarse según el método de tinción. Los métodos tricrómicos se utilizan actualmente para diferenciar el músculo del colágeno, las células alfa hipofisarias de las células beta, la fibrina del colágeno y las mitocondrias en cortes de músculo fresco congelado, entre otras aplicaciones. Ayuda a identificar aumentos en el tejido colagenoso (es decir, cambios fibróticos), como en la cirrosis hepática , y a distinguir tumores que se originan en células musculares y fibroblastos. ^{[ 1 ]}

Las técnicas de tinción tricrómica emplean dos o más colorantes ácidos . Normalmente, los colorantes ácidos tiñen las mismas proteínas básicas, pero al aplicarlos secuencialmente se puede manipular el patrón de tinción. Se utiliza un poliácido (como el ácido fosfomolíbdico o el ácido fosfotúngstico ) para eliminar el colorante de forma selectiva. Se cree que los poliácidos se comportan como colorantes de alto peso molecular : desplazan el colorante fácilmente eliminable del colágeno.

Generalmente, primero se aplica un colorante rojo en ácido acético diluido para teñir todos los componentes. Luego, se aplica un poliácido para eliminar el colorante rojo del colágeno y otros componentes por desplazamiento. Se aplica un segundo colorante ácido (azul o verde) en ácido acético diluido que, a su vez, desplaza el poliácido, lo que da como resultado un colágeno teñido con un color contrastante al del colorante inicial. Si se van a teñir los eritrocitos, se aplica un colorante amarillo o naranja de bajo peso molecular antes de la tinción con el colorante rojo. Este se suele aplicar a partir de una solución saturada en etanol al 80% y, a menudo, junto con ácido pícrico (que también es un colorante) y un poliácido. Estos métodos aprovechan pequeñas diferencias en la reacción de los tejidos a los colorantes, la densidad, la accesibilidad, etc.

Las tinciones tricrómicas en las que los colorantes y un poliácido se aplican secuencialmente se denominan tricrómicas de varios pasos . En los métodos de "un solo paso", todos los colorantes —con o sin poliácido— se combinan en una sola solución. Uno de los métodos de un solo paso más antiguos para la tinción tricrómica es el método de van Gieson, que tiñe el músculo y el citoplasma de amarillo, y el colágeno de rojo. Otro es la tinción tricrómica de Gömöri , que imita fielmente la tricrómica de Masson. En los métodos de "yellowsolve", primero se aplica un colorante rojo en ácido acético diluido, luego se deshidrata completamente la sección para asegurar que no quede humedad. A continuación, el colorante rojo se desplaza por un colorante amarillo en un disolvente, como el cellosolve (2-etoxietanol). El nombre yellowsolve es una combinación de los términos amarillo y cellosolve . La floxina-tartrazina de Lendrum para inclusiones celulares es un ejemplo de tinción yellowsolve.

Entre los colorantes utilizados para la tinción tricrómica se encuentran:

Rojo

Fucsina ácida , xilidina ponceau, cromótropo 2R, escarlata de Biebrich , ponceau 6R, floxina

Azul y verde

Verde claro SF amarillento, verde rápido FCF , azul de metilo , azul de agua

Amarillo

Ácido pícrico , naranja G , amarillo de Martius , tartrazina , amarillo de molienda

• tinción por dispersión
• Microscopía
• Microscopía de contraste de fase

• Baker JR (1958) Principios de microtécnica biológica. Londres: Methuen. (También reimpresión en rústica, Franklin Classics Trade Press, EE. UU., 2018. ISBN 978-0353331044.)
• Horobin RW (1982) Histoquímica. Stuttgart: Gustav Fischer. ISBN 3437107003.
• Horobin RW (1988) Comprensión de la histoquímica. Chichester: Ellis Horwood. ISBN 9780470210604.
• Kiernan JA (2015) Métodos histológicos e histoquímicos, 5.ª ed. Banbury, Reino Unido: Scion. ISBN 9781907904325.
• Prento P. (2009) Tinción de macromoléculas: posibles mecanismos y ejemplos. Biotech. Histochem. 84: 139-158.
• Puchtler H. Isler H. (1958) El efecto del ácido fosfomolíbdico sobre la tinción de los tejidos conectivos con diversos colorantes. J. Histochem. Cytochem. 6: 265-270.
• Reid PE. Iagallo M., Nehr S., Jankunis M., Morrow P. (1993) Mecanismo de las técnicas de tejido conectivo. 1. El efecto de la concentración del colorante y el tiempo de tinción en los procedimientos con colorantes aniónicos. Histochem. J. 25: 821-829.

• Protocolo tricrómico de Masson