tinción de H&E

La tinción de hematoxilina y eosina ( o tinción de hematoxilina y eosina o tinción de hematoxilina-eosina ; a menudo abreviada como tinción H&E o tinción HE ) es una de las principales tinciones de tejido utilizadas en histología . ^{[ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]} Es la tinción más utilizada en el diagnóstico médico ^{[ 1 ]} y a menudo es el estándar de oro . ^{[ 4 ]} Por ejemplo, cuando un patólogo examina una biopsia de un cáncer sospechoso , es probable que la sección histológica esté teñida con H&E.

La tinción H&E es la combinación de dos tinciones histológicas: hematoxilina y eosina . La hematoxilina tiñe los núcleos celulares de un azul violáceo, y la eosina tiñe la matriz extracelular y el citoplasma de rosa, mientras que otras estructuras adquieren diferentes tonalidades, matices y combinaciones de estos colores. ^{[ 5 ] [ 6 ]} Por lo tanto, un patólogo puede diferenciar fácilmente entre las partes nuclear y citoplasmática de una célula, y además, los patrones generales de coloración de la tinción muestran la disposición y distribución general de las células y proporcionan una visión general de la estructura de una muestra de tejido. ^{[ 7 ]} Así, el reconocimiento de patrones, tanto por parte de expertos humanos como por software que los asiste (en patología digital ), proporciona información histológica.

Esta combinación de tinción fue introducida en 1877 por el químico Nicolaus Wissozky en la Universidad Imperial de Kazán en Rusia. ^{[ 7 ] [ 8 ]}

El procedimiento de tinción con H&E es la tinción principal en histología ^{[ 3 ] [ 7 ] [ 2 ] [ 5 ]} en parte porque se puede realizar rápidamente, ^{[ 7 ]} no es costoso y tiñe los tejidos de tal manera que se revela una cantidad considerable de anatomía microscópica ^{[ 9 ] [ 10 ]} , ^{[ 7 ] [ 5 ] [ 4 ]} y se puede utilizar para diagnosticar una amplia gama de afecciones histopatológicas . ^{[ 8 ]} Los resultados de la tinción con H&E no dependen excesivamente del químico utilizado para fijar el tejido ni de pequeñas inconsistencias en el protocolo de laboratorio, ^{[ 11 ]} y estos factores contribuyen a su uso rutinario en histología. ^{[ 7 ]}

La tinción con H&E no siempre proporciona suficiente contraste para diferenciar todos los tejidos, estructuras celulares o la distribución de sustancias químicas, ^{[ 9 ]} y en estos casos se utilizan tinciones y métodos más específicos. ^{[ 10 ] [ 7 ]}

Existen muchas maneras de preparar las soluciones de hematoxilina (formulación) utilizadas en el procedimiento H&E, ^{[ 11 ] [ 12 ] [ 6 ]} además, existen muchos protocolos de laboratorio para producir portaobjetos teñidos con H&E, ^{[ 9 ]} algunos de los cuales pueden ser específicos de un laboratorio determinado. ^{[ 7 ]} Aunque no existe un procedimiento estándar, ^{[ 11 ] [ 9 ]} los resultados por convención son razonablemente consistentes en que los núcleos celulares se tiñen de azul y el citoplasma y la matriz extracelular se tiñen de rosa. ^{[ 7 ]} Los laboratorios de histología también pueden ajustar la cantidad o el tipo de tinción para un patólogo en particular. ^{[ 7 ]}

Después de recolectar los tejidos (a menudo como biopsias ) y fijarlos, generalmente se deshidratan y se incluyen en parafina fundida ; el bloque resultante se monta en un micrótomo y se corta en láminas finas. ^{[ 6 ]} Las láminas se fijan a portaobjetos de microscopio, momento en el que se retira la parafina con un disolvente y las láminas de tejido adheridas a los portaobjetos se rehidratan y quedan listas para la tinción. ^{[ 6 ]} Como alternativa, la tinción de hematoxilina-eosina (H&E) es la más utilizada en la cirugía de Mohs, en la que los tejidos generalmente se congelan, se cortan en un criostato (un micrótomo que corta tejido congelado), se fijan en alcohol y luego se tiñen. ^{[ 9 ]}

El método de tinción H&E implica la aplicación de hematoxilina mezclada con una sal metálica o mordiente , a menudo seguida de un enjuague en una solución ácida débil para eliminar el exceso de tinción ( diferenciación ), seguido de un azulado en agua ligeramente alcalina . ^{[ 13 ] [ 8 ] [ 14 ]} Después de la aplicación de hematoxilina, el tejido se contratiñe con eosina (más comúnmente eosina Y ). ^{[ 6 ] [ 8 ] [ 7 ]}

La hematoxilina colorea principalmente los núcleos de las células de azul o púrpura oscuro, ^{[ 6 ] [ 15 ] [ 14 ]} junto con algunos otros tejidos, como los gránulos de queratohialina y el material calcificado . La eosina tiñe el citoplasma y algunas otras estructuras, incluida la matriz extracelular como el colágeno ^{[ 5 ] [ 7 ] [ 14 ]} en hasta cinco tonos de rosa. ^{[ 8 ]} Las estructuras eosinofílicas (sustancias que se tiñen con eosina) ^{[ 5 ]} generalmente están compuestas de proteínas intracelulares o extracelulares . Los cuerpos de Lewy y los cuerpos de Mallory son ejemplos de estructuras eosinofílicas. La mayor parte del citoplasma es eosinofílico y se vuelve rosa. ^{[ 10 ] [ 15 ]} Los glóbulos rojos se tiñen de rojo intenso.

Aunque la hemateína , una forma oxidada de hematoxilina, ^{[ 5 ] [ 16 ] [ 14 ]} es el colorante activo (cuando se combina con un mordiente), la tinción todavía se denomina hematoxilina . ^{[ 8 ] [ 13 ]} La hematoxilina, cuando se combina con un mordiente (más comúnmente alumbre de aluminio ) a menudo se considera que "se asemeja" ^{[ 10 ]} a una tinción básica, con carga positiva o catiónica . ^{[ 5 ]} La eosina es una tinción aniónica (con carga negativa) y ácida. ^{[ 5 ] [ 10 ]} La tinción de núcleos por hemalum (una combinación de iones de aluminio y hemateína) ^{[ 14 ]} se debe normalmente a la unión del complejo tinte-metal al ADN, pero la tinción nuclear se puede obtener después de la extracción de ADN ^{[ 14 ]} de secciones de tejido. El mecanismo es diferente al de la tinción nuclear por colorantes básicos (catiónicos) como la tionina o el azul de toluidina . ^{[ 10 ]} La tinción por colorantes básicos ocurre solo a partir de soluciones menos ácidas que el hemalum, y se previene mediante la extracción química o enzimática previa de los ácidos nucleicos. Hay evidencia que indica que los enlaces de coordinación, similares a los que mantienen unidos el aluminio y la hemateína, unen el complejo de hemalum al ADN y a los grupos carboxilo de las proteínas en la cromatina nuclear .

Las estructuras no tienen que ser ácidas o básicas para ser llamadas basófilas o eosinófilas; la terminología se basa en la afinidad de los componentes celulares por los colorantes. Otros colores, como el amarillo y el marrón, pueden estar presentes en la muestra; estos se deben a pigmentos intrínsecos como la melanina . Las láminas basales deben teñirse con tinción PAS o con alguna tinción de plata para que sean bien visibles. Las fibras reticulares también requieren tinción de plata. Las estructuras hidrofóbicas también tienden a permanecer transparentes; estas suelen ser ricas en grasas, como los adipocitos , la mielina que rodea los axones neuronales y las membranas del aparato de Golgi .

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• Guía informativa SIGMA-ALDRICH H&E