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Tinción H&E

Principales tipos de tinción observados en la tinción H&E. Retina (parte del ojo ) teñida con hematoxilina y eosina , núcleos celulares teñidos de azul violeta y material extrac...

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Principales tipos de tinción observados en la tinción H&E.
Retina (parte del ojo ) teñida con hematoxilina y eosina , núcleos celulares teñidos de azul violeta y material extracelular teñido de rosa.

La tinción de hematoxilina y eosina ( o tinción de hematoxilina y eosina o tinción de hematoxilina-eosina ; a menudo abreviada como tinción H&E o tinción HE ) es una de las principales tinciones de tejido utilizadas en histología . [1] [2] [3] Es la tinción más utilizada en el diagnóstico médico [1] y a menudo es el estándar de oro . [4] Por ejemplo, cuando un patólogo observa una biopsia de un cáncer sospechoso , es probable que la sección histológica esté teñida con H&E.

La hematoxilina y la eosina son la combinación de dos tinciones histológicas: hematoxilina y eosina . La hematoxilina tiñe los núcleos celulares de un azul violáceo, y la eosina tiñe la matriz extracelular y el citoplasma de rosa, y otras estructuras adquieren diferentes tonos, matices y combinaciones de estos colores. [5] [6] Por lo tanto, un patólogo puede diferenciar fácilmente entre las partes nuclear y citoplasmática de una célula y, además, los patrones generales de coloración de la tinción muestran la disposición y distribución general de las células y proporcionan una visión general de la estructura de una muestra de tejido. [7] Por lo tanto, el reconocimiento de patrones, tanto por parte de los propios expertos humanos como por parte del software que ayuda a esos expertos (en patología digital ), proporciona información histológica.

Esta combinación de tinciones fue introducida en 1877 por el químico Nicolaus Wissozky en la Universidad Imperial de Kazán en Rusia. [8] [7]

Usos

El procedimiento de tinción con H&E es la tinción principal en histología [3] [7] [2] [5] en parte porque se puede realizar rápidamente, [7] no es costoso y tiñe los tejidos de tal manera que se revela una cantidad considerable de anatomía microscópica [9] [10] , [7] [5] [4] y se puede utilizar para diagnosticar una amplia gama de condiciones histopatológicas . [8] Los resultados de la tinción con H&E no dependen demasiado del producto químico utilizado para fijar el tejido o de ligeras inconsistencias en el protocolo de laboratorio, [11] y estos factores contribuyen a su uso rutinario en histología. [7]

La tinción H&E no siempre proporciona suficiente contraste para diferenciar todos los tejidos, estructuras celulares o la distribución de sustancias químicas, [9] y en estos casos se utilizan tinciones y métodos más específicos. [10] [7]

Método de aplicación

Gradilla de portaobjetos que se retira de un baño de tinción de hematoxilina.

Existen muchas maneras de preparar las soluciones de hematoxilina (formulación) utilizadas en el procedimiento H&E, [11] [12] [6] además, existen muchos protocolos de laboratorio para producir portaobjetos teñidos con H&E, [9] algunos de los cuales pueden ser específicos de un determinado laboratorio. [7] Aunque no existe un procedimiento estándar, [11] [9] los resultados por convención son razonablemente consistentes en que los núcleos celulares se tiñen de azul y el citoplasma y la matriz extracelular se tiñen de rosa. [7] Los laboratorios de histología también pueden ajustar la cantidad o el tipo de tinción para un patólogo en particular. [7]

Una vez que se han recolectado los tejidos (a menudo como biopsias ) y fijado, generalmente se deshidratan y se incrustan en cera de parafina derretida ; el bloque resultante se monta en un micrótomo y se corta en rodajas finas. [6] Las rodajas se fijan a portaobjetos de microscopio, momento en el que se retira la cera con un solvente y las rodajas de tejido adheridas a los portaobjetos se rehidratan y están listas para la tinción. [6] Alternativamente, la tinción H&E es la tinción más utilizada en la cirugía de Mohs en la que los tejidos generalmente se congelan, se cortan en un criostato (un micrótomo que corta tejido congelado), se fijan en alcohol y luego se tiñen. [9]

El método de tinción H&E implica la aplicación de hematoxilina mezclada con una sal metálica o mordiente , a menudo seguida de un enjuague en una solución de ácido débil para eliminar el exceso de tinción ( diferenciación ), seguido de un azulado en agua ligeramente alcalina . [13] [8] [14] Después de la aplicación de hematoxilina, el tejido se contratiñe con eosina (más comúnmente eosina Y ). [6] [8] [7]

Resultados

La hematoxilina tiñe principalmente de azul o morado oscuro los núcleos de las células , [6] [15] [14] junto con algunos otros tejidos, como los gránulos de queratohialina y el material calcificado . La eosina tiñe el citoplasma y algunas otras estructuras, incluida la matriz extracelular, como el colágeno [5] [7] [14], en hasta cinco tonos de rosa. [8] Las estructuras eosinofílicas (sustancias que se tiñen con eosina) [5] generalmente están compuestas de proteínas intracelulares o extracelulares . Los cuerpos de Lewy y los cuerpos de Mallory son ejemplos de estructuras eosinofílicas. La mayor parte del citoplasma es eosinófilo y se vuelve rosa. [10] [15] Los glóbulos rojos se tiñen de rojo intenso. [ cita requerida ]

Modo de acción

Aunque la hemateína , una forma oxidada de la hematoxilina, [5] [16] [14] es el colorante activo (cuando se combina con un mordiente), la tinción todavía se conoce como hematoxilina . [8] [13] La hematoxilina, cuando se combina con un mordiente (más comúnmente alumbre de aluminio ) a menudo se considera que "se asemeja" [10] a una tinción básica, con carga positiva o catiónica . [5] La eosina es una tinción aniónica (con carga negativa) y ácida. [5] [10] La tinción de núcleos por hemalum (una combinación de iones de aluminio y hemateína) [14] se debe habitualmente a la unión del complejo tinte-metal al ADN, pero la tinción nuclear se puede obtener después de la extracción de ADN [14] de secciones de tejido. El mecanismo es diferente al de la tinción nuclear por tintes básicos (catiónicos) como la tionina o el azul de toluidina . [10] La tinción con colorantes básicos se produce únicamente a partir de soluciones menos ácidas que el hemalum, y se evita mediante una extracción química o enzimática previa de los ácidos nucleicos. Hay evidencia que indica que los enlaces coordinados, similares a los que mantienen unidos al aluminio y la hemateína, unen el complejo de hemalum al ADN y a los grupos carboxilo de las proteínas en la cromatina nuclear . [ cita requerida ]

Las estructuras no tienen que ser ácidas o básicas para ser llamadas basófilas y eosinofílicas; la terminología se basa en la afinidad de los componentes celulares por los colorantes. Otros colores, por ejemplo, amarillo y marrón, pueden estar presentes en la muestra; son causados ​​por pigmentos intrínsecos como la melanina . Las láminas basales deben teñirse con tinción PAS o algunas tinciones de plata , si tienen que ser bien visibles. Las fibras reticulares también requieren tinción de plata. Las estructuras hidrófobas también tienden a permanecer transparentes; estas suelen ser ricas en grasas, por ejemplo, adipocitos , mielina alrededor de los axones de las neuronas y membranas del aparato de Golgi . [ cita requerida ]

Ejemplos de tejidos teñidos con H&E

  • Hueso, núcleos celulares (azul-violeta), matriz ósea (rosa).
    Hueso , núcleos celulares (azul-violeta), matriz ósea (rosa).
  • Carcinoma ductal in situ (CDIS) en tejido mamario, núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
    Carcinoma ductal in situ (CDIS) en tejido mamario, núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
  • Tejido pulmonar extraído de un paciente con enfisema. Núcleos celulares (azul violeta), glóbulos rojos (rojo brillante), otros cuerpos celulares y material extracelular (rosa) y espacios de aire (blanco).
    Tejido pulmonar extraído de un paciente con enfisema . Núcleos celulares (azul violeta), glóbulos rojos (rojo brillante), otros cuerpos celulares y material extracelular (rosa) y espacios de aire (blanco).
  • Tejido muscular, núcleos celulares (azul-violeta), cuerpo celular (rosa).
    Tejido muscular , núcleos celulares (azul-violeta), cuerpo celular (rosa).
  • Carcinoma de células basales de la piel, núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
    Carcinoma de células basales de la piel , núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).

Referencias

  1. ^ ab Titford, M. (2005). "La larga historia de la hematoxilina". Biotechnic & Histochemistry . 80 (2): 73–80. doi :10.1080/10520290500138372. PMID  16195172. S2CID  20338201.
  2. ^ ab Smith C (2006). "Nuestra deuda con el palo de Campeche: la historia de la hematoxilina". MLO Med Lab Obs . 38 (5): 18, 20–2. PMID  16761865.
  3. ^ ab Dapson RW, Horobin RW (2009). "Tintes desde una perspectiva del siglo XXI". Biotech Histochem . 84 (4): 135–7. doi :10.1080/10520290902908802. PMID  19384743. S2CID  28563610.
  4. ^ ab Rosai J (2007). "Por qué la microscopía seguirá siendo una piedra angular de la patología quirúrgica". Lab Invest . 87 (5): 403–8. doi : 10.1038/labinvest.3700551 . PMID  17401434.
  5. ^ abcdefgh Chan JK (2014). "Los maravillosos colores de la tinción de hematoxilina-eosina en la patología quirúrgica diagnóstica". Int J Surg Pathol . 22 (1): 12–32. doi :10.1177/1066896913517939. PMID  24406626. S2CID  26847314.
  6. ^ abcdef Stevens, Alan (1982). "Las hematoxilinas". En Bancroft, John; Stevens, Alan (eds.). La teoría y la práctica de las técnicas histológicas (2.ª ed.). Longman Group Limited. pág. 109.
  7. ^ abcdefghijkl Wittekind D (2003). "Tinción tradicional para el diagnóstico patológico de rutina, incluyendo el papel del ácido tánico. 1. Valor y limitaciones de la tinción de hematoxilina-eosina". Biotech Histochem . 78 (5): 261–70. doi :10.1080/10520290310001633725. PMID  14989644. S2CID  10563849.
  8. ^ abcdef Titford, Michael (2009). "Progreso en el desarrollo de técnicas microscópicas para el diagnóstico patológico". Revista de histotecnología . 32 (1): 9–19. doi : 10.1179/his.2009.32.1.9 . ISSN  0147-8885. S2CID  26801839.
  9. ^ abcde Larson K, Ho HH, Anumolu PL, Chen TM (2011). "Tinción tisular con hematoxilina y eosina en cirugía micrográfica de Mohs: una revisión". Dermatol Surg . 37 (8): 1089–99. doi :10.1111/j.1524-4725.2011.02051.x. PMID  21635628. S2CID  2538853.{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  10. ^ abcdef Ross, Michael H.; Pawlina, Wojciech (2016). Histología: texto y atlas: con biología celular y molecular correlacionada (7.ª ed.). Wolters Kluwer. pp. 984p. ISBN 978-1451187427.
  11. ^ abc Schulte EK (1991). "Estandarización de colorantes y tinciones biológicas: dificultades y posibilidades". Histoquímica . 95 (4): 319–28. doi :10.1007/BF00266958. PMID  1708749. S2CID  29628388.
  12. ^ Llewellyn BD (2009). "Tinción nuclear con hematoxilina de alumbre". Biotech Histochem . 84 (4): 159–77. doi :10.1080/10520290903052899. PMID  19579146. S2CID  205713596.
  13. ^ ab Ortiz-Hidalgo C, Pina-Oviedo S (2019). "Hematoxilina: el regalo de Mesoamérica a la histopatología. Palo de Campeche, el tesoro más deseado de los piratas y un tinte tisular irreemplazable". Int J Surg Pathol . 27 (1): 4–14. doi : 10.1177/1066896918787652 . PMID  30001639.
  14. ^ abcdef Kiernan JA (2018). "¿La tinción nuclear progresiva con hemalum (hematoxilina de alumbre) afecta al ADN y cuál es la naturaleza del complejo colorante-cromatina?". Biotech Histochem . 93 (2): 133–148. doi :10.1080/10520295.2017.1399466. PMID  29320873. S2CID  13481905.
  15. ^ ab Leeson, Thomas S.; Leeson, C. Roland (1981). Histología (cuarta edición). WB Saunders Company. pág. 600. ISBN 978-0721657042.
  16. ^ Kahr, Bart; Lovell, Scott; Subramony, Anand (1998). "El progreso del extracto de palo de Campeche". Quiralidad . 10 (1–2): 66–77. doi :10.1002/chir.12.

Lectura adicional

  • Kiernan JA (2008) Métodos histológicos e histoquímicos: teoría y práctica. 4ª ed. Bloxham, Reino Unido: Scion.
  • Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Tinciones nucleares con colorantes de laca de mordiente de metacromo soluble. El efecto de las reacciones de bloqueo de grupos terminales químicos y la introducción artificial de grupos ácidos en los tejidos. Histochemistry 49: 23–35.
  • Llewellyn BD (2009) Tinción nuclear con alúmina-hematoxilina. Biotecnología. Histochem. 84: 159–177.
  • Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Aplicación de conceptos químicos actuales a tinciones de metal-hemateína y -brasileína. Histoquímica 85: 353–364.
  • Manual informativo sobre H&E de SIGMA-ALDRICH

Protocolo

  • Tinción de rutina de hematoxilina y eosina de Mayer (H&E) Archivado el 2 de junio de 2023 en Wayback Machine
  • Protocolo de tinción con hematoxilina y eosina (H&E)
  • Laboratorio Rosen, Departamento de Biología Molecular y Celular, Facultad de Medicina de Baylor) Protocolo paso a paso
  • La mancha HE
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