Histopatología

La histopatología (compuesta por tres palabras griegas : ἱστός histos 'tejido', πάθος pathos 'sufrimiento' y -λογία -logia 'estudio de') es el examen microscópico de tejidos para estudiar las manifestaciones de las enfermedades . Específicamente, en medicina clínica, la histopatología se refiere al examen de una biopsia o muestra quirúrgica por un patólogo , después de que la muestra haya sido procesada y las secciones histológicas se hayan colocado en portaobjetos. En cambio, la citopatología examina células libres o microfragmentos de tejido (como "bloques celulares").

El examen histopatológico de los tejidos comienza con una cirugía , una biopsia o una autopsia . El tejido se extrae del cuerpo o de la planta y, a menudo tras una disección experta en estado fresco, se coloca en un fijador que lo estabiliza para evitar su descomposición . El fijador más común es el formaldehído neutro tamponado al 10 % (equivalente a formaldehído al 3,7 % p/v en agua tamponada neutra, como la solución salina tamponada con fosfato ).

A continuación, el tejido se prepara para su observación al microscopio mediante fijación química o criosección.

Si se proporciona una muestra grande, por ejemplo, de un procedimiento quirúrgico, un patólogo examina la muestra de tejido y selecciona la parte con mayor probabilidad de proporcionar un diagnóstico útil y preciso. Esta parte se extrae para su examen mediante un proceso comúnmente conocido como preparación o corte. Las muestras más grandes se cortan para ubicar correctamente sus estructuras anatómicas en el casete. Ciertas muestras (especialmente las biopsias) pueden someterse a una preinclusión en agar para asegurar la correcta orientación del tejido en el casete, luego en el bloque y, finalmente, en la lámina de microscopía diagnóstica. Posteriormente, se coloca en un casete de plástico para la mayor parte del resto del proceso.

Procesamiento de secciones congeladas

Una evaluación inicial de un linfoma sospechoso consiste en realizar una "preparación por contacto", en la que se presiona ligeramente un portaobjetos contra el tejido linfoide extirpado y posteriormente se tiñe (generalmente con tinción de hematoxilina-eosina ) para su evaluación mediante microscopía óptica . El segundo método de procesamiento histológico se denomina procesamiento de secciones congeladas . Este es un método científico altamente técnico realizado por un histocientífico capacitado. En este método, el tejido se congela y se corta en láminas finas utilizando un micrótomo montado en un dispositivo de refrigeración por debajo del punto de congelación llamado criostato . Las láminas congeladas se montan en un portaobjetos, se fijan de forma inmediata y breve en un fijador líquido y se tiñen utilizando técnicas de tinción similares a las de las secciones tradicionales incluidas en parafina. Las ventajas de este método son el rápido tiempo de procesamiento, la menor necesidad de equipo y la menor necesidad de ventilación en el laboratorio. La desventaja es la baja calidad de la lámina final. Se utiliza en patología intraoperatoria para determinaciones que pueden ayudar a elegir el siguiente paso en la cirugía durante esa sesión quirúrgica (por ejemplo, para determinar preliminarmente la claridad del margen de resección de un tumor durante la cirugía).

Esto se puede aplicar a preparaciones histológicas mediante fijación química o a preparaciones por congelación. Para observar el tejido al microscopio, las secciones se tiñen con uno o más pigmentos . El objetivo de la tinción es revelar los componentes celulares; se utilizan contratinciones para proporcionar contraste.

La tinción más utilizada en histología es la combinación de hematoxilina y eosina (a menudo abreviada como H&E). La hematoxilina se usa para teñir los núcleos de azul , mientras que la eosina tiñe el citoplasma y la matriz de tejido conectivo extracelular de la mayoría de las células de rosa . Existen cientos de otras técnicas que se han utilizado para teñir selectivamente las células. Otros compuestos utilizados para colorear secciones de tejido incluyen safranina , Rojo Óleo O , Rojo Congo , sales de plata y colorantes artificiales. La histoquímica se refiere a la ciencia que utiliza reacciones químicas entre sustancias químicas de laboratorio y componentes dentro del tejido. Una técnica histoquímica que se realiza comúnmente es la reacción de azul de Prusia de Perls , que se utiliza para demostrar depósitos de hierro en enfermedades como la hemocromatosis . ^{[ 2 ]}

Recientemente, se han utilizado anticuerpos para teñir proteínas , lípidos y carbohidratos específicos . Esta técnica, denominada inmunohistoquímica , ha mejorado notablemente la capacidad de identificar categorías celulares específicas bajo el microscopio. Otras técnicas avanzadas incluyen la hibridación in situ para identificar moléculas específicas de ADN o ARN . Estos métodos de tinción con anticuerpos suelen requerir el uso de histología de secciones congeladas. Estos procedimientos también se llevan a cabo en el laboratorio bajo la supervisión y precisión de un técnico de laboratorio clínico especializado (un histocientífico). Cada vez se utilizan más cámaras digitales para capturar imágenes histopatológicas.

Las preparaciones histológicas son examinadas al microscopio por un patólogo , un especialista médico cualificado que ha completado un programa de formación reconocido. Este diagnóstico médico se formula en un informe patológico que describe los hallazgos histológicos y la opinión del patólogo. En el caso del cáncer , esto representa el diagnóstico tisular necesario para la mayoría de los protocolos de tratamiento. En la extirpación del cáncer , el patólogo indicará si el margen quirúrgico está libre de tumor o si está afectado (queda cáncer residual). Esto se realiza utilizando el método de procesamiento de pan o el método CCPDMA . Los artefactos visuales microscópicos pueden provocar diagnósticos erróneos de las muestras. El escaneo de las preparaciones permite diversos métodos de patología digital , incluida la aplicación de inteligencia artificial para la interpretación.

A continuación se muestran ejemplos de características generales de hallazgos sospechosos que pueden apreciarse con distintos niveles de aumento en la histopatología:

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  Orientación (aumento mínimo): En este caso, la orientación se basa en la superficie de la piel (verde). Se observa una lesión (rojo) y se puede discernir su delimitación (difusa en este caso).
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  Patrón arquitectónico de cualquier célula sospechosa, en este caso nidos de células, así como componentes del estroma intermedio.
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  Disposición celular , incluyendo el hacinamiento y la polaridad celular (tendencias comunes entre las células en el borde, como el alargamiento o la disposición en empalizada en este caso). La cantidad de mitosis también se puede apreciar a este nivel.
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  Características subcelulares (puede requerir el mayor aumento)

• Patología anatómica
• Patología molecular
• Procedimiento de sección congelada
• tecnólogo médico
• microdisección por captura láser
• Lista de patólogos

• Histopatología del cuello uterino - atlas digital (Grupo de Cribado de la IARC)
• Presentación virtual de histopatología - Universidad de Iowa