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Vectores en la terapia génica

Cómo funcionan los vectores para transferir material genético La terapia génica utiliza la introducción de ADN en las células, lo cual puede lograrse mediante diversos métodos, ...

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Cómo funcionan los vectores para transferir material genético

La terapia génica utiliza la introducción de ADN en las células, lo cual puede lograrse mediante diversos métodos, que se resumen a continuación. Las dos clases principales de métodos son aquellos que utilizan virus recombinantes (a veces denominados nanopartículas biológicas o vectores virales) y aquellos que utilizan ADN desnudo o complejos de ADN (métodos no virales).

virus

Todos los virus se unen a sus huéspedes e introducen su material genético en la célula huésped como parte de su ciclo de replicación. Este material genético contiene las instrucciones básicas para producir más copias de estos virus, manipulando la maquinaria de producción normal del organismo para satisfacer las necesidades del virus. La célula huésped ejecutará estas instrucciones y producirá copias adicionales del virus, lo que provocará que cada vez más células se infecten. Algunos tipos de virus insertan su genoma en el citoplasma del huésped , pero no entran realmente en la célula. Otros penetran la membrana celular disfrazados de moléculas de proteína y entran en la célula.

Existen dos tipos principales de infección viral: lítica y lisogénica . Poco después de insertar su ADN, los virus del ciclo lítico se reproducen rápidamente, salen de la célula e infectan a otras. Los virus lisogénicos integran su ADN en el de la célula huésped y pueden vivir en el organismo durante muchos años antes de reaccionar ante un desencadenante. El virus se reproduce al mismo ritmo que la célula y no causa daño al organismo hasta que se activa. Este desencadenante libera el ADN del huésped y lo utiliza para crear nuevos virus.

Retrovirus

El material genético de los retrovirus se presenta en forma de moléculas de ARN , mientras que el material genético de sus huéspedes se presenta en forma de ADN. Cuando un retrovirus infecta una célula huésped, introduce su ARN junto con algunas enzimas, a saber, la transcriptasa inversa y la integrasa , en la célula. Esta molécula de ARN del retrovirus debe producir una copia de ADN a partir de su propia molécula de ARN antes de poder integrarse en el material genético de la célula huésped. El proceso de producción de una copia de ADN a partir de una molécula de ARN se denomina transcripción inversa . Es llevado a cabo por una de las enzimas que contiene el virus, llamada transcriptasa inversa . Una vez que esta copia de ADN se ha producido y se encuentra libre en el núcleo de la célula huésped, debe incorporarse al genoma de la célula huésped. Es decir, debe insertarse en las grandes moléculas de ADN de la célula (los cromosomas). Este proceso lo realiza otra enzima que contiene el virus, llamada integrasa .

Ahora que se ha insertado el material genético del virus, se puede decir que la célula huésped se ha modificado para contener nuevos genes. Si esta célula huésped se divide posteriormente, sus descendientes contendrán todos los nuevos genes. En ocasiones, los genes del retrovirus no expresan su información de inmediato.

Uno de los problemas de la terapia génica con retrovirus es que la enzima integrasa puede insertar el material genético del virus en cualquier posición arbitraria del genoma del huésped; lo inserta aleatoriamente en un cromosoma. Si el material genético se inserta en medio de uno de los genes originales de la célula huésped, este gen se verá afectado ( mutagénesis insercional ). Si el gen es uno que regula la división celular, puede producirse una división celular descontrolada (es decir, cáncer ). Este problema se ha empezado a abordar recientemente mediante el uso de nucleasas de dedos de zinc [ 1 ] o mediante la inclusión de ciertas secuencias, como la región de control del locus de la beta-globina, para dirigir el sitio de integración a sitios cromosómicos específicos.

Los ensayos de terapia génica que utilizan vectores retrovirales para tratar la inmunodeficiencia combinada grave ligada al cromosoma X (X-SCID) representan la aplicación más exitosa de la terapia génica hasta la fecha. Más de veinte pacientes han sido tratados en Francia y Gran Bretaña, observándose una alta tasa de reconstitución del sistema inmunitario. Ensayos similares fueron restringidos o suspendidos en EE. UU. cuando se notificó leucemia en pacientes tratados en el ensayo francés de terapia génica para X-SCID. [ 2 ] Hasta la fecha, cuatro niños en el ensayo francés y uno en el ensayo británico han desarrollado leucemia como resultado de la mutagénesis por inserción del vector retroviral. Todos menos uno de estos niños respondieron bien al tratamiento antileucémico convencional. Los ensayos de terapia génica para tratar la SCID debida a la deficiencia de la enzima adenosina desaminasa ( ADA ) (una forma de SCID) [ 3 ] continúan con relativo éxito en EE. UU., Gran Bretaña, Irlanda, Italia y Japón.

Adenovirus

Los adenovirus son virus que transportan su material genético en forma de ADN de doble cadena. Causan infecciones respiratorias, intestinales y oculares en humanos (especialmente el resfriado común ). Cuando estos virus infectan una célula huésped, introducen su molécula de ADN en ella. El material genético de los adenovirus no se incorpora (es transitorio) al material genético de la célula huésped. La molécula de ADN permanece libre en el núcleo de la célula huésped, y las instrucciones de esta molécula de ADN adicional se transcriben como cualquier otro gen. La única diferencia es que estos genes adicionales no se replican cuando la célula está a punto de dividirse, por lo que las células descendientes no tendrán el gen adicional. [ 4 ]

Como resultado, el tratamiento con el adenovirus requerirá una readministración en una población celular creciente, aunque la ausencia de integración en el genoma de la célula huésped debería prevenir el tipo de cáncer observado en los ensayos SCID. Este sistema vectorial se ha promovido para el tratamiento del cáncer y, de hecho, el primer producto de terapia génica autorizado para tratar el cáncer, Gendicine , es un adenovirus. Gendicine, una terapia génica basada en p53 adenoviral , fue aprobada por los reguladores chinos de alimentos y medicamentos en 2003 para el tratamiento del cáncer de cabeza y cuello. Advexin, un enfoque de terapia génica similar de Introgen, fue rechazado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) en 2008. [ 5 ]

Tras la muerte de Jesse Gelsinger en 1999, mientras participaba en un ensayo de terapia génica, surgieron preocupaciones sobre la seguridad de los vectores de adenovirus . Desde entonces, la investigación con vectores de adenovirus se ha centrado en versiones genéticamente limitadas del virus.

Citomegalovirus

El citomegalovirus (CMV) pertenece a la subfamilia de los β-herpesvirus, que incluye a los roseolovirus. El CMV coevolucionó con diversos huéspedes mamíferos, como el CMV humano (HCMV), el CMV murino (MCMV) y el CMV de macaco Rhesus (RhCMV). Los CMV se caracterizan por tener genomas de ADN grandes y, por lo general, una infección asintomática en huéspedes sanos.

La primera investigación sobre el citomegalovirus (CMV) como vector de terapia génica se publicó en el año 2000. El tropismo del CMV por las células progenitoras hematopoyéticas y su gran genoma (230 kbp) atrajeron inicialmente a los investigadores. [ 6 ] Desde entonces, se han utilizado vectores de vacunas basados ​​en CMV para inducir la respuesta de las células T. [ 7 ] Más recientemente, se administró CMV que contenía telomerasa y folistatina por vía intravenosa e intranasal en estudios con ratones con la intención de prolongar la esperanza de vida saludable. [ 8 ]

Pseudotipificación de la proteína de envoltura de vectores virales

Los vectores virales descritos anteriormente tienen poblaciones de células hospedadoras naturales que infectan con mayor eficiencia. Los retrovirus tienen rangos limitados de células hospedadoras naturales, y aunque el adenovirus y el virus adenoasociado pueden infectar una gama relativamente más amplia de células de manera eficiente, algunos tipos de células también son resistentes a la infección por estos virus. La unión y entrada a una célula susceptible está mediada por la envoltura proteica en la superficie del virus. Los retrovirus y los virus adenoasociados tienen una sola proteína que recubre su membrana, mientras que los adenovirus están recubiertos tanto por una proteína de envoltura como por fibras que se extienden desde la superficie del virus. Las proteínas de envoltura de cada uno de estos virus se unen a moléculas de la superficie celular, como el sulfato de heparina , lo que los localiza en la superficie del hospedador potencial, así como con el receptor proteico específico que induce cambios estructurales que promueven la entrada en la proteína viral, o localiza el virus en endosomas donde la acidificación del lumen induce este replegamiento de la cubierta viral . En ambos casos, la entrada en las células huésped potenciales requiere una interacción favorable entre una proteína de la superficie del virus y una proteína de la superficie de la célula.

Para los fines de la terapia génica, se puede querer limitar o ampliar el rango de células susceptibles a la transducción por un vector de terapia génica. Con este fin, se han desarrollado muchos vectores en los que las proteínas endógenas de la envoltura viral se han reemplazado por proteínas de envoltura de otros virus o por proteínas quiméricas. Dicha quimera consistiría en las partes de la proteína viral necesarias para su incorporación al virión, así como en secuencias destinadas a interactuar con proteínas específicas de la célula huésped. Los virus en los que las proteínas de la envoltura se han reemplazado como se describe se denominan virus pseudotipados . Por ejemplo, el vector retroviral más utilizado en ensayos de terapia génica ha sido el lentivirus del virus de la inmunodeficiencia símica ( VSV ) recubierto con la proteína de la envoltura, proteína G , del virus de la estomatitis vesicular (VSV ). Este vector se denomina lentivirus pseudotipado VSV G e infecta un conjunto casi universal de células. Este tropismo es característico de la proteína G del VSV con la que está recubierto este vector. Se han realizado numerosos intentos para limitar el tropismo de los vectores virales a una o pocas poblaciones de células huésped. Este avance permitiría la administración sistémica de una cantidad relativamente pequeña de vector. Se reduciría el potencial de modificación celular no deseada y se disiparían muchas preocupaciones de la comunidad médica. La mayoría de los intentos por limitar el tropismo han utilizado proteínas de envoltura quiméricas que contienen fragmentos de anticuerpos . Estos vectores son muy prometedores para el desarrollo de terapias génicas de vanguardia.

Vectores con capacidad de replicación

En las células tumorales en replicación se utiliza un vector con capacidad de replicación denominado ONYX-015. Se observó que, en ausencia de la proteína viral E1B-55Kd, el adenovirus provocaba una apoptosis muy rápida en las células infectadas p53(+), lo que resultaba en una reducción drástica de la progenie viral y la ausencia de propagación posterior. La apoptosis se debía principalmente a la capacidad del EIA para inactivar p300. En las células p53(-), la eliminación de E1B 55kd no tiene consecuencias en términos de apoptosis, y la replicación viral es similar a la del virus de tipo salvaje, lo que provoca la muerte masiva de células.

Un vector defectuoso para la replicación elimina algunos genes esenciales. Estos genes eliminados siguen siendo necesarios en el organismo, por lo que se reemplazan con un virus auxiliar o una molécula de ADN. [ 9 ]

Elementos cis y trans

Los vectores defectuosos para la replicación siempre contienen un "constructo de transferencia". Este constructo transporta el gen que se va a transducir o "transgén". El constructo de transferencia también contiene las secuencias necesarias para el funcionamiento general del genoma viral: secuencia de empaquetamiento, repeticiones para la replicación y, cuando sea necesario, el cebado de la transcripción inversa. Estos se denominan elementos cis-activos, ya que deben estar en la misma molécula de ADN que el genoma viral y el gen de interés. Los elementos trans-activos son elementos virales que pueden estar codificados en una molécula de ADN diferente. Por ejemplo, las proteínas estructurales virales pueden expresarse a partir de un elemento genético distinto al del genoma viral. [ 9 ]

Virus del herpes simple

El virus del herpes simple es un virus neurotrópico humano. Se estudia principalmente para la transferencia de genes en el sistema nervioso. El virus HSV-1 de tipo salvaje puede infectar neuronas y evadir la respuesta inmune del huésped, pero aún así puede reactivarse y producir un ciclo lítico de replicación viral. Por lo tanto, es común utilizar cepas mutantes de HSV-1 que son deficientes en su capacidad de replicación. Aunque el virus latente no es transcripcionalmente aparente, posee promotores específicos de neuronas que pueden continuar funcionando normalmente. Los anticuerpos contra el HSV-1 son comunes en humanos, sin embargo, las complicaciones debidas a la infección por herpes son relativamente raras. [ 10 ] Se debe tener precaución con los casos raros de encefalitis, lo que proporciona cierta justificación para usar HSV-2 como vector viral, ya que generalmente tiene tropismo por las células neuronales que inervan el área urogenital del cuerpo y podría así evitar al huésped una patología cerebral grave.

Métodos no virales

Los métodos no virales presentan ciertas ventajas sobre los virales, siendo la producción a gran escala y la baja inmunogenicidad en el huésped solo dos de ellas. Anteriormente, los bajos niveles de transfección y expresión del gen suponían una desventaja para los métodos no virales; sin embargo, los recientes avances en la tecnología de vectores han dado lugar a moléculas y técnicas con eficiencias de transfección similares a las de los virus. [ 11 ]

Inyección de ADN desnudo

Este es el método más sencillo de transfección no viral. Se han realizado ensayos clínicos con inyección intramuscular de un plásmido de ADN desnudo con cierto éxito; sin embargo, la expresión ha sido muy baja en comparación con otros métodos de transfección. Además de los ensayos con plásmidos, se han realizado ensayos con productos de PCR desnudos , que han tenido un éxito similar o mayor. La captación celular de ADN desnudo suele ser ineficiente. Los esfuerzos de investigación centrados en mejorar la eficiencia de la captación de ADN desnudo han dado lugar a varios métodos novedosos, como la electroporación , la sonoporación y el uso de una " pistola génica ", que dispara partículas de oro recubiertas de ADN hacia la célula mediante gas a alta presión. [ 12 ]

Métodos físicos para mejorar la entrega

Electroporación

La electroporación es un método que utiliza pulsos cortos de alto voltaje para introducir ADN a través de la membrana celular. Se cree que este impacto provoca la formación temporal de poros en la membrana celular, permitiendo el paso de las moléculas de ADN. La electroporación suele ser eficaz y funciona en una amplia gama de tipos celulares. Sin embargo, la elevada tasa de muerte celular que se produce tras la electroporación ha limitado su uso, incluso en aplicaciones clínicas.

Más recientemente, se ha utilizado un método de electroporación más novedoso, denominado transfección por avalancha de electrones, en experimentos de terapia génica. Mediante una descarga de plasma de alto voltaje, se introdujo ADN de forma eficiente con pulsos muy cortos (de microsegundos). En comparación con la electroporación, esta técnica resultó en una mayor eficiencia y menor daño celular.

pistola genética

El bombardeo de partículas, o pistola génica , es otro método físico de transfección de ADN. En esta técnica, el ADN se recubre sobre partículas de oro y se introduce en un dispositivo que genera una fuerza para lograr la penetración del ADN en las células, dejando el oro en un disco de retención.

Sonoporación

La sonoporación utiliza frecuencias ultrasónicas para introducir ADN en las células. Se cree que el proceso de cavitación acústica altera la membrana celular y permite que el ADN penetre en las células.

Magnetofección

En un método denominado magnetofección , el ADN se compleja con partículas magnéticas y se coloca un imán debajo de la placa de cultivo de tejidos para poner los complejos de ADN en contacto con una monocapa celular.

suministro hidrodinámico

La administración hidrodinámica implica la inyección rápida de un gran volumen de una solución en el sistema vascular (como la vena cava inferior , el conducto biliar o la vena caudal ). La solución contiene moléculas que se insertarán en las células, como plásmidos de ADN o siRNA , y la transferencia de estas moléculas a las células se ve facilitada por la elevada presión hidrostática causada por el gran volumen de solución inyectada. [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ]

Métodos químicos para mejorar la administración

Oligonucleótidos

El uso de oligonucleótidos sintéticos en la terapia génica consiste en desactivar los genes implicados en el proceso de la enfermedad. Existen varios métodos para lograrlo. Una estrategia utiliza ARN antisentido específico para el gen diana, interrumpiendo así la transcripción del gen defectuoso. Otra emplea pequeñas moléculas de ARN, denominadas siRNA, para indicar a la célula que corte secuencias específicas en el ARNm del gen defectuoso, interrumpiendo su traducción y, por consiguiente, la expresión del gen. Una estrategia adicional utiliza oligodesoxirribonucleótidos de doble cadena como señuelo para los factores de transcripción necesarios para activar la transcripción del gen diana. Los factores de transcripción se unen a los señuelos en lugar del promotor del gen defectuoso, lo que reduce la transcripción del gen diana y, por ende, su expresión. Asimismo, se han utilizado oligonucleótidos de ADN de cadena simple para dirigir un cambio de una sola base dentro de un gen mutante. El oligonucleótido se diseña para hibridar de forma complementaria con el gen diana, con la excepción de una base central, la base diana, que sirve como base molde para la reparación. Esta técnica se conoce como reparación génica mediada por oligonucleótidos, reparación génica dirigida o alteración nucleotídica dirigida.

Lipocomplejos

Para mejorar la introducción del nuevo ADN en la célula, este debe protegerse de daños y tener carga positiva. Inicialmente, se utilizaron lípidos aniónicos y neutros para la construcción de lipoplejos para vectores sintéticos. Sin embargo, a pesar de su baja toxicidad, su compatibilidad con los fluidos corporales y la posibilidad de adaptarlos a tejidos específicos, su producción es compleja y requiere mucho tiempo, por lo que se centró la atención en las versiones catiónicas.

Los lípidos catiónicos , debido a su carga positiva, se utilizaron inicialmente para condensar moléculas de ADN con carga negativa y así facilitar la encapsulación del ADN en liposomas. Posteriormente, se descubrió que el uso de lípidos catiónicos mejoraba significativamente la estabilidad de los lipoplejos. Además, debido a su carga, los liposomas catiónicos interactúan con la membrana celular, y se creía que la endocitosis era la principal vía por la que las células los captaban. Los endosomas se forman como resultado de la endocitosis; sin embargo, si los genes no pueden liberarse al citoplasma rompiendo la membrana del endosoma, se envían a los lisosomas, donde todo el ADN se destruye antes de que pueda cumplir sus funciones. También se descubrió que, si bien los lípidos catiónicos por sí mismos podían condensar y encapsular el ADN en liposomas, la eficiencia de transfección era muy baja debido a la falta de capacidad de "escape endosomal". Sin embargo, cuando se añadieron lípidos auxiliares (generalmente lípidos electroneutrales, como el DOPE) para formar lipoplejos, se observó una eficiencia de transfección mucho mayor. Posteriormente, se descubrió que ciertos lípidos tienen la capacidad de desestabilizar las membranas endosomales para facilitar la liberación del ADN del endosoma; por lo tanto, estos lípidos se denominan lípidos fusogénicos. Si bien los liposomas catiónicos se han utilizado ampliamente como alternativa para vectores de administración génica, también se observó una toxicidad dependiente de la dosis de los lípidos catiónicos que podría limitar sus usos terapéuticos. [ 16 ]

El uso más común de los lipoplejos ha sido en la transferencia de genes a células cancerosas, donde los genes suministrados activan genes supresores de tumores y disminuyen la actividad de los oncogenes. Estudios recientes han demostrado la utilidad de los lipoplejos en la transfección de células epiteliales respiratorias .

Polimerosomas

Los polimerosomas son versiones sintéticas de los liposomas ( vesículas con una bicapa lipídica ), compuestas de copolímeros de bloque anfifílicos . Pueden encapsular contenidos hidrofílicos o hidrofóbicos y se utilizan para administrar sustancias como ADN, proteínas o fármacos a las células. Entre las ventajas de los polimerosomas sobre los liposomas se incluyen una mayor estabilidad, resistencia mecánica, tiempo de circulación sanguínea y capacidad de almacenamiento. [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ]

Poliplexos

Los complejos de polímeros con ADN se denominan poliplejos. [ 16 ] [ 20 ] La mayoría de los poliplejos consisten en polímeros catiónicos y su fabricación se basa en el autoensamblaje mediante interacciones iónicas. Una diferencia importante entre los métodos de acción de los poliplejos y los lipoplejos es que los poliplejos no pueden liberar directamente su carga de ADN en el citoplasma. Como resultado, se requirió la cotransfección con agentes endosomalíticos, como el adenovirus inactivado, para facilitar el escape de las nanopartículas de la vesícula endocítica formada durante la captación de partículas. Sin embargo, una mejor comprensión de los mecanismos por los cuales el ADN puede escapar de la vía endolisosomal, es decir, el efecto de esponja de protones, [ 21 ] ha impulsado nuevas estrategias de síntesis de polímeros, como la incorporación de residuos protonables en la cadena principal del polímero, y ha revitalizado la investigación sobre sistemas basados ​​en policatiónes. [ 22 ]

Debido a su baja toxicidad, alta capacidad de carga y facilidad de fabricación, los nanotransportadores policatiónicos demuestran un gran potencial en comparación con sus rivales, como los vectores virales, que muestran alta inmunogenicidad y potencial carcinogenicidad, y los vectores lipídicos, que causan toxicidad dependiente de la dosis. La polietilenimina [ 23 ] y el quitosano se encuentran entre los transportadores poliméricos que se han estudiado ampliamente para el desarrollo de terapias de administración génica. Otros transportadores policatiónicos, como los poli(beta-aminoésteres) [ 24 ] y el polifosforamidato [ 25 ], se están incorporando a la biblioteca de posibles transportadores génicos. Además de la variedad de polímeros y copolímeros, la facilidad para controlar el tamaño, la forma y la química superficial de estos nanotransportadores poliméricos les confiere una ventaja en la capacidad de focalización y en el aprovechamiento del efecto de permeabilidad y retención mejoradas. [ 26 ]

Dendrímeros

Un dendrímero es una macromolécula altamente ramificada con forma esférica. La superficie de la partícula puede funcionalizarse de diversas maneras, y muchas de las propiedades de la estructura resultante están determinadas por su superficie.

En particular, es posible construir un dendrímero catiónico, es decir, uno con carga superficial positiva. En presencia de material genético como ADN o ARN, la complementariedad de cargas da lugar a una asociación temporal del ácido nucleico con el dendrímero catiónico. Al llegar a su destino, el complejo dendrímero-ácido nucleico es incorporado a la célula mediante endocitosis.

En los últimos años, los lípidos catiónicos han sido el referente en agentes de transfección. Se ha informado que las limitaciones de estos reactivos alternativos incluyen: la incapacidad para transfectar algunos tipos de células, la falta de capacidades de focalización activa robustas, la incompatibilidad con modelos animales y la toxicidad. Los dendrímeros ofrecen una construcción covalente robusta y un control extremo sobre la estructura molecular y, por lo tanto, sobre el tamaño. En conjunto, estas características brindan ventajas significativas en comparación con los métodos existentes.

La producción de dendrímeros ha sido históricamente un proceso lento y costoso, compuesto por numerosas reacciones lentas, un obstáculo que limitó considerablemente su desarrollo comercial. La empresa Dendritic Nanotechnologies, con sede en Michigan, descubrió un método para producir dendrímeros mediante química cinética, un proceso que no solo redujo el costo en un factor de tres, sino que también acortó el tiempo de reacción de más de un mes a tan solo unos días. Estos nuevos dendrímeros "Priostar" pueden diseñarse específicamente para transportar ADN o ARN, transfectando células con alta eficiencia y con poca o ninguna toxicidad.

nanopartículas inorgánicas

Se ha demostrado que las nanopartículas inorgánicas, como el oro , la sílice , el óxido de hierro (por ejemplo, magnetofección ) y los fosfatos de calcio, son capaces de administrar genes. [ 27 ] Algunas de las ventajas de los vectores inorgánicos radican en su estabilidad de almacenamiento, su bajo coste de fabricación y, a menudo, su tiempo, su baja inmunogenicidad y su resistencia al ataque microbiano.  Se ha demostrado que los materiales de tamaño nanométrico inferiores a 100 nm atrapan eficazmente el ADN o el ARN y permiten su escape del endosoma sin degradación. También se ha demostrado que los materiales inorgánicos mejoran la transfección in vitro de líneas celulares adheridas debido a su mayor densidad y su ubicación preferencial en la base de la placa de cultivo. Los puntos cuánticos también se han utilizado con éxito y permiten el acoplamiento de la terapia génica con un marcador fluorescente estable. Asimismo, se están desarrollando nanopartículas orgánicas diseñadas, que podrían utilizarse para la administración conjunta de genes y agentes terapéuticos. [ 28 ]

Péptidos penetrantes de células

Los péptidos penetrantes celulares (PPC), también conocidos como dominios de transducción de péptidos (DTP), son péptidos cortos (< 40 aminoácidos) que atraviesan eficazmente las membranas celulares al unirse de forma covalente o no covalente a diversas moléculas, facilitando así la entrada de estas moléculas en las células. La entrada celular se produce principalmente por endocitosis , aunque también existen otros mecanismos de entrada. Algunos ejemplos de moléculas transportadas por los PPC son los ácidos nucleicos , los liposomas y los fármacos de bajo peso molecular. [ 29 ] [ 30 ]

La carga de CPP puede dirigirse a orgánulos celulares específicos mediante la incorporación de secuencias de localización en las secuencias de CPP. Por ejemplo, las secuencias de localización nuclear se utilizan comúnmente para guiar la carga de CPP al núcleo. [ 31 ] Para guiarla a las mitocondrias, se puede utilizar una secuencia de direccionamiento mitocondrial ; este método se utiliza en la protofección (una técnica que permite insertar ADN mitocondrial extraño en las mitocondrias de las células). [ 32 ] [ 33 ]

métodos híbridos

Debido a que cada método de transferencia genética tiene sus limitaciones, se han desarrollado algunos métodos híbridos que combinan dos o más técnicas. Los virosomas son un ejemplo; combinan liposomas con un virus del VIH o de la gripe inactivado . Se ha demostrado que esto permite una transferencia genética más eficiente en células epiteliales respiratorias que los métodos virales o liposomales por separado. Otros métodos implican la mezcla de otros vectores virales con lípidos catiónicos o la hibridación de virus .

Véase también

Referencias

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