placa de agar

Una placa de agar es una placa de Petri que contiene un medio de cultivo solidificado con agar , utilizado para cultivar microorganismos . A veces se añaden compuestos selectivos para influir en el crecimiento, como antibióticos . ^{[ 1 ]}

Los microorganismos individuales colocados en la placa crecerán formando colonias individuales , cada una un clon genéticamente idéntico al organismo ancestro individual (excepto por la baja e inevitable tasa de mutación ). Por lo tanto, la placa puede utilizarse para estimar la concentración de organismos en un cultivo líquido o una dilución adecuada de dicho cultivo mediante un contador de colonias , o para generar cultivos genéticamente puros a partir de un cultivo mixto de organismos genéticamente diferentes.

Existen varios métodos para sembrar células. Una técnica se conoce como " estría ". En esta técnica, se extiende una gota del cultivo, colocada en el extremo de un asa de siembra estéril y delgada , a veces llamada inoculador, sobre la superficie del agar, dejando microorganismos en mayor cantidad al inicio de la estría y disminuyendo al final. En algún momento durante una siembra exitosa, la cantidad de microorganismos depositados será tal que se desarrollarán colonias individuales bien definidas en esa área, las cuales pueden ser separadas para su posterior cultivo, utilizando otra asa estéril.

Otra forma de sembrar organismos en placas de agar, además de la siembra por estrías, es el análisis de puntos . Este tipo de análisis se usa a menudo para comprobar la viabilidad de las células y se realiza con agujas (también llamadas "froggers"). Una tercera técnica consiste en usar perlas de vidrio estériles para sembrar células. En esta técnica, las células se cultivan en un medio líquido, del cual se pipetea un pequeño volumen sobre la placa de agar y luego se extiende con las perlas. La replicación en placa es otra técnica utilizada para sembrar células en placas de agar. Estas cuatro técnicas son las más comunes, pero también son posibles otras. Es crucial trabajar de manera estéril para evitar la contaminación de las placas de agar. ^{[ 1 ]} Por lo tanto, la siembra se suele realizar en una cabina de flujo laminar o en la mesa de trabajo junto a un mechero Bunsen . ^{[ 2 ]}

En 1881, Fanny Hesse , que trabajaba como técnica para su marido Walther Hesse en el laboratorio de Robert Koch , sugirió el agar como agente gelificante eficaz, ya que se había utilizado habitualmente en la elaboración de mermeladas durante algún tiempo. ^{[ 3 ]}

Al igual que otros medios de cultivo , las formulaciones de agar utilizadas en placas pueden clasificarse como "definidas" o "indefinidas"; un medio definido se sintetiza a partir de sustancias químicas individuales requeridas por el organismo, por lo que se conoce su composición molecular exacta, mientras que un medio indefinido se elabora a partir de productos naturales como el extracto de levadura , cuya composición precisa se desconoce. ^{[ 4 ]}

Las placas de agar pueden formularse como permisivas, con la intención de permitir el crecimiento de cualquier organismo presente, o restrictivas o selectivas, con la intención de permitir únicamente el crecimiento de un subconjunto particular de esos organismos. ^{[ 5 ]} Esto puede adoptar la forma de un requerimiento nutricional, por ejemplo, proporcionando un compuesto particular como la lactosa como única fuente de carbono y seleccionando así solo los organismos que pueden metabolizar ese compuesto, o incluyendo un antibiótico particular u otra sustancia para seleccionar solo los organismos que son resistentes a esa sustancia. Esto se correlaciona en cierta medida con los medios definidos e indefinidos; los medios indefinidos, hechos de productos naturales y que contienen una combinación desconocida de muchas moléculas orgánicas, suelen ser más permisivos en términos de satisfacer las necesidades de una variedad más amplia de organismos. Por el contrario, los medios definidos pueden ajustarse con precisión para seleccionar organismos con propiedades específicas.

Las placas de agar también pueden ser placas indicadoras, en las que los organismos no se seleccionan en función del crecimiento, sino que se distinguen por un cambio de color en algunas colonias, generalmente causado por la acción de una enzima sobre algún compuesto añadido al medio. ^{[ 6 ]}

Las placas se incuban durante un período de 12 horas a varios días, dependiendo de la prueba que se realice.

Los tipos de placas de agar más utilizados incluyen:

agar sangre

placa de agar sangre

Las placas de agar sangre (PAS) contienen sangre de mamíferos (generalmente de oveja o caballo), típicamente a una concentración del 5-10%. Las PAS se enriquecen y se utiliza un medio diferencial para aislar organismos exigentes y detectar la actividad hemolítica . La actividad β-hemolítica mostrará la lisis y digestión completa del contenido de los glóbulos rojos que rodean una colonia. Ejemplos de ello son Streptococcus haemolyticus . La α-hemólisis solo causa una lisis parcial de los glóbulos rojos (la membrana celular permanece intacta) y aparece de color verde o marrón debido a la conversión de hemoglobina en metahemoglobina. Un ejemplo de esto sería Streptococcus viridans . La γ-hemólisis (o no hemolítica) es el término que se refiere a la ausencia de actividad hemolítica. ^{[ 7 ]} Las PAS también contienen extracto de carne o extracto de levadura , triptona , cloruro de sodio y agar. ^{[ 8 ]}

agar chocolate

El agar chocolate es un tipo de placa de agar sangre en la que las células sanguíneas se lisan calentándolas a 80  °C. Se utiliza para el cultivo de bacterias respiratorias exigentes, como Haemophilus influenzae . El agar chocolate recibe su nombre por su color, aunque la placa no contiene chocolate .

Agar Thayer-Martin

El agar Thayer-Martin es un agar de chocolate diseñado para aislar Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis .

Agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa

El agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa mejora el crecimiento de Vibrio spp. , incluyendo Vibrio cholerae . ^{[ 9 ]}

Medios de cultivo bacterianos generales

• El agar bilis-esculina se utiliza para el aislamiento de Enterococcus y especies de Streptococcus del grupo D.
• El agar CLED ( agar deficiente en cisteína , lactosa y electrolitos) se utiliza para aislar y diferenciar las bacterias del tracto urinario, ya que inhibe la proliferación de especies de Proteus y permite distinguir entre bacterias fermentadoras de lactosa y no fermentadoras.
• El medio Granada se utiliza para aislar y diferenciar Streptococcus del grupo B y Streptococcus agalactiae a partir de muestras clínicas. En este medio, Streptococcus crece formando colonias rojas, y la mayoría de las bacterias acompañantes se inhiben.
• El agar entérico Hektoen está diseñado para aislar y recuperar bacterias fecales de la familia Enterobacteriaceae . Es particularmente útil para aislar Salmonella y Shigella .
• El caldo de lisogenia se utiliza para cultivar Escherichia coli . ^{[ 10 ]}
• El agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial que se utiliza para diferenciar entre bacterias gramnegativas e inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas . La adición de sales biliares y cristal violeta al agar inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias grampositivas, lo que hace que el agar MacConkey sea selectivo. Se añaden lactosa y rojo neutro para diferenciar las bacterias fermentadoras de lactosa, que forman colonias rosadas, de las no fermentadoras, que forman colonias claras. Un medio alternativo, el azul de metileno con eosina, cumple una función similar. ^{[ 11 ]}
• El agar sal manitol es un medio selectivo y diferencial. El manitol indica la presencia de organismos que lo fermentan: la fermentación del manitol produce ácido láctico , lo que disminuye el pH y tiñe la placa de amarillo. La sal sirve para seleccionar organismos halófilos ; aquellos que no toleran una alta concentración de sal no pueden crecer adecuadamente.
• El agar Mueller-Hinton contiene infusión de carne, peptona y almidón , y se utiliza principalmente para pruebas de sensibilidad a los antibióticos. Puede presentarse en forma de agar sangre .
• El agar nutritivo se utiliza habitualmente para el crecimiento de microorganismos poco exigentes y para la observación de la producción de pigmentos. Su uso es seguro en laboratorios de ciencias escolares, ya que no favorece el crecimiento selectivo de bacterias patógenas .
• El agar Önöz permite un diagnóstico bacteriológico más rápido, ya que las colonias de Salmonella y Shigella se pueden diferenciar de forma clara y fiable de otras Enterobacteriaceae. El rendimiento de Salmonella en muestras de heces obtenidas con este medio es mayor que el obtenido con agar LEIFSON o agar Salmonella-Shigella .
• El agar con alcohol feniletílico selecciona las especies de Staphylococcus a la vez que inhibe los bacilos Gram negativos (por ejemplo, Escherichia coli , Shigella , Proteus , etc.).
• El agar R2A , un medio no específico, imita al agua, por lo que se utiliza para el análisis de agua.
• El agar tripticasa de soja (TSA) es un medio de cultivo de uso general que se obtiene mediante la digestión enzimática de la harina de soja y la caseína . Con frecuencia, es el medio base de otros tipos de agar; por ejemplo, las placas de agar sangre se preparan enriqueciendo placas de TSA con sangre. Las placas de TSA permiten el crecimiento de muchas bacterias semi-exigentes, incluidas algunas especies de Brucella , Corynebacterium , Listeria , Neisseria y Vibrio .
• El agar xilosa - lisina - desoxicolato se utiliza para el cultivo de muestras de heces y contiene dos indicadores. Está formulado para inhibir las bacterias Gram positivas, mientras que favorece el crecimiento de los bacilos Gram negativos . Las colonias de bacterias fermentadoras de lactosa presentan un color amarillo. También se utiliza para cultivar la posible presencia de Salmonella en una muestra de alimento. La mayoría de las colonias de Salmonella producen un centro negro en este agar.
• El agar cetrimida se utiliza para el aislamiento selectivo de la bacteria Gram-negativa Pseudomonas aeruginosa .
• El agar Tinsdale contiene telurito de potasio , que puede aislar Corynebacterium diphteriae . ^{[ 9 ]}

Medios de levadura

• El medio YEPD se utiliza a menudo como medio de cultivo general para levaduras como Saccharomyces cerevisiae y Candida albicans.
• El medio de esporulación se utiliza cuando se requiere la formación de esporas. También puede emplearse al trabajar con hongos o bacterias, dependiendo de si la cepa es capaz de formar esporas o no.

• Arte microbiano
• placa viral

Diferentes tipos específicos de agar:

• Agar nutritivo de caseína
• Agar MRS
• Agar de la ciudad de Nueva York

• Vídeo de preparación del agar sangre de oveja
• Compañeros de la Ciencia: Todo sobre el agar
• Vídeo sobre métodos de siembra aséptica
• Vídeo sobre cómo utilizar perlas de vidrio para preparar muestras.